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二穗短柄草(Brachypodium distachyon)属于早熟禾亚科,常用名为紫色短柄草(Purple False Brome),简称短柄草,是一种一年生的温带禾本科植物,起源于中东、北非、亚洲和欧洲,分布较广。Bd21作为二穗短柄草不同生态型中的一种,具有个体小、染色体数目少、基因组小、序列重复性低(低于15%)、甲基化水平低、遗传资源丰富、种植密度高、生长周期短、自交繁殖、适应性广、容易转化等特点,与拟南芥相似;并且具有禾本科植物许多共性,如抗病性、颖果等。这些都使二穗短柄草满足了作为良好的禾本科模式植物的要求。因此,二穗短柄草可以作为水稻和拟南芥很好的补充,是一种非常有研究前途的禾本科植物的新型模式植物。本研究从以下两个方面进行:
二穗短柄草生物学习性的研究。以二穗短柄草Bd21为材料,采用土培的方法,分别在三种光周期条件下培养:长日照(16 h光照,8h黑暗)、短日照(8h光照,16 h黑暗)及全日照(24 h光照),温度均为为23℃±2℃,光照强度为5μmol.m-2.s-1,观察二穗短柄草的生长特性和形态发育。结果表明在不同的生长条件下植株的开花时间、开花时植株高度、节数、叶片数、成熟时植株的高度、分枝穗数、分枝数、籽粒数和根系分布的深度等存在很大的差异。其中开花时间最早的是24小时光照条件下生长的植株,在生长到28天时就开花;其次为长日照和短日照下生长的植株;分枝穗数、分枝数和籽粒数最多的是长日照条件下生长的植株;根系分布最深的是长日照下生长的植株,在土中的分布为12cm左右,其次为短日照和全日照下生长的植株;而且通过观察三种条件下生长的二穗短柄草Bd21植株的各项生长特性表明,二穗短柄草Bd21属于长日照植物,并且不同于其他禾本科植物,二穗短柄草Bd21具有分枝穗的特性。
Ramosa2基因的克隆。Ramosa2基因是控制分枝穗的基因。为了深入研究二穗短柄草的分枝穗特性,本研究对ramosa2进行了克隆。以二穗短柄草Bd21基因组为模板,以小麦、大麦、玉米、高粱和水稻中ramosa2基因保守序列为参考设计引物,PCR扩增到4个850bp左右的基因片段Bd21-1、Bd21-2、Bd21-3和Bd21-4,它们的同源性为99.9%。序列分析表明,该核酸序列与小麦、大麦、玉米、高粱和水稻中ramosa2基因的同源性在59.1~62.0%之间,同时本研究克隆的4个基因片段,它们可能是二穗短柄草LBD转录家族中发现的第一个基因(LBD转录因子是高等植物中特有的一类新基因家族,根据对已克隆的几个LBD基因的功能研究,推测LBD基因参与了高等植物侧生器官的发育)。其在分枝穗形成中的作用有待于进一步研究。