水稻激素测定方法的建立及水稻抗病相关基因突变体鉴定

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水稻是世界上主要的粮食作物之一,世界上一半人以大米为食物。粮食增产是目前全世界面临的问题,而稻瘟病,白叶枯病和细菌性条斑病等水稻病害一直威胁着水稻产量,通过改良水稻自身防御体系来提高水稻本身的抗病性是最经济有效的手段。研究水稻的抗病机理对水稻抗病育种具有重要意义。本研究通过运用质谱技术建立了检测激素变化的方法,该方法致力于开发新的简单的样品前处理和分离方法,为研究植物抗病等各种生命活动提供方法支持;同时利用植物功能基因组学的各种研究手段,研究了一个水稻抗病相关基因在水稻抗病反应中的部一功能。采用简单的抽提方法抽提水稻激素,简单除杂后,利用反向色谱分离方法,以电喷雾串联质谱作为检测系统分析水稻中各种激素含量。同时与文献中报道的方法对比,本方法材料制备简单,操作简便,省事省力,灵敏度高,重现性好;可以灵敏的检测水稻中生长素及其结合物,茉莉酸及其结合物,脱落酸,水杨酸和一些植保素。我们成功利用此方法,检测了牡丹江8和Rbl在接种白叶枯菌PX061以后各种激素和质保素的含量变化,同时检测了各种激素合成代谢基因表达情况。为水稻激素测定的定量分析提供了一种简单,可靠的方法。采用混合模式固相萃取的串联组合,成功建立了灵敏精确定量水稻内源细胞分裂素和赤霉素的方法,应用此方法同时可以检测生长素及其结合物,茉莉酸及其结合物,脱落酸,水杨酸。此方法在经过C18柱除去色素和脂类后,上样混合模式SPE小柱,经过适当溶剂洗脱,可以高灵敏的检测各种激素。我们利用0.1克水稻样品即可检测各种水稻内源的细胞分裂素以及其他各种激素,实现了水稻各种激素微量准确检测。此方法的建立对于研究水稻抗病以及水稻激素代谢与各种生命活动之间的联系有重要应用价值。通过筛选本实验室水稻T-DNA插入突变体库,得到40个水稻类病斑突变体家系,其中一个类病斑突变体03211MP37的侧翼序列与表型共分离;得到一个抗病突变体03211BB48和一个感病突变体04Z11QG04(OsFBL52)。OsFBL52含有17个外显子,突变体T-DNA插在第15和第16个外显子之间的内含子中,使得OsFBL52基因完全沉默。水稻中OsFBL52隶属一个大家族,这个家族至少包含有60个成员;但是目前还不清楚这个家族中基因的功能。纯合突变体植株中,OsFBL52的表达完全沉默,接种白叶枯菌后共分离分析表明OsFBL52是水稻抗白叶枯菌的正调控因子。OsFBL52的沉默使水稻更感白叶枯病菌,同时增加水稻株高。水稻株高的增加主要是由于水稻茎杆节间长度的增加。利用定量RT-PCR的方法检测突变体中赤霉素合成相关基因的表达发现,OsGA2ox, OsGA20ox, and Os30ox都上升表达。我们推测OsFBL52突变体正调控水稻抗病反应,可能是通过调节赤霉素的合成来修饰水稻的抗病反应完成的。
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