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蛋白酶体(Proteasome)是细胞内蛋白质降解的主要途径之一,其主要功能是降解受损伤或错误折叠的蛋白质。有研究报道酪蛋白激酶II(CKⅡ)磷酸化20S蛋白酶体的C8(α7)亚基对26S蛋白酶体的稳定性有重要作用,但对于蛋白酶体活性的影响不甚清楚,本文旨在探讨CKⅡ对蛋白酶体活性的调节作用。方法:我们主要从细胞内和细胞外两方面着手来研究CKⅡ对蛋白酶体活性的调节作用,(1)探讨CKⅡ对细胞内蛋白酶体活性的作用,首先用CKⅡ抑制剂(1uM DMAT、5 uM CX-4945、10 uM TBB)处理NRK细胞,16 h后收集细胞制备细胞核提取物,使用人工合成的荧光肽底物Suc-LLVY-AMC和Boc-LSTR-AMC分别测量不同核提取物中的胰凝乳蛋白酶样和胰蛋白酶样肽酶活性;CKⅡ抑制剂短时间处理NRK或293T细胞,检测细胞核提取物中的两种肽酶活性;CKⅡ抑制剂(0.5/1 uM DMAT,0.25/0.5/1/5 uM CX-4945,1/5/10 uM TBB)分别处理NRK或293T细胞过夜,Western blot检测细胞内泛素化蛋白的含量;将GFP-CL1质粒转染到293T细胞中,CKⅡ抑制剂(1 uM DMAT,5 uM CX-4945,10 uM TBB)处理细胞过夜,检测细胞中GFP的荧光含量。(2)研究CKⅡ在细胞内的定位,CKⅡ全酶是由两个催化亚基(α或α’)和2个β调节亚基组成的异四聚体,免疫荧光实验检测CKⅡ各亚基在细胞中的定位情况;提取正常NRK细胞的核蛋白和胞浆蛋白,Western blot检测核蛋白和胞浆蛋白内CKⅡα、CKⅡα’、CKⅡβ的表达情况。(3)研究CKⅡ在细胞外对蛋白酶体活性的作用,用1U的CKⅡ分别处理NRK细胞核提取物,纯化的26S或20S蛋白酶体,检测NRK细胞核提取物,纯化的26S或20S蛋白酶体内的两种肽酶活性。结果:(1)CKⅡ抑制剂激活细胞内的蛋白酶体活性:1 uM DMAT、5 uM CX-4945、10 uM TBB处理NRK细胞16 h后,显著激活了细胞核提取物中的胰凝乳蛋白酶样和胰蛋白酶样肽酶活性;CKⅡ抑制剂短时间处理NRK细胞,5 uM TBB在处理细胞30 min后可以检测到对两种肽酶活性的激活,DMAT和CX-4945分别在处理细胞2 h和4 h后才能够检测到对两种肽酶活性的激活;0.5 uM DMAT、0.25uM CX-4945、1 uM TBB处理293T细胞30 min后,显著激活了细胞核提取物中的胰凝乳蛋白酶样和胰蛋白酶样肽酶活性;CKⅡ抑制剂(0.5/1 uM DMAT,0.25/0.5/1/5 uM CX-4945,1/5/10 uM TBB)处理NRK或293T细胞后,加速了细胞中泛素化蛋白的清除;CKⅡ抑制剂对GFP-CL1的降解无明显作用。(2)NRK和293T细胞中CKⅡα、CKⅡα’、CKⅡβ主要定位于细胞核中;CKⅡα、CKⅡα’、CKⅡβ的主要表达于细胞核中。(3)CKⅡ在细胞外抑制蛋白酶体活性:CKⅡ抑制NRK细胞核提取物,纯化的26S和20S蛋白酶体内的两种肽酶活性。结论:酪蛋白激酶II对蛋白酶体的活性有抑制作用,并直接作用于26S和20S蛋白酶体。