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血吸虫病是一种慢性消耗性寄生虫病,严重影响发展中国家的公共卫生安全。日本血吸虫病在我国南方广泛流行,对人民身体健康和畜牧业生产等造成了重大损害。血吸虫具有免疫逃避特性,可在宿主体内长期存活。补体的溶细胞作用是机体抵抗病原微生物及人体寄生虫感染的重要防御机制。血吸虫具有多种调节宿主补体活性的机制。研究表明,四跨膜孤儿受体（TOR）蛋白是一种位于血吸虫体被表面的补体C2抗原受体,可以通过结合补体C2a分子抑制补体活性。本文利用PCR技术扩增到日本血吸虫SjTOR完整的蛋白编码区1245bp,将其克隆到pXJ40-FLAG载体的HindⅢ、XhoⅠ酶切位点,成功构建真核表达质粒pXJ40-FLAG-TOR。将测序正确的质粒转染到293T细胞中进行表达,转染48 h后,应用间接免疫荧光染色可观察到转染重组质粒的细胞有特异性绿色荧光,空质粒对照则未见。实时荧光定量PCR结果显示,在转染pXJ40-FLAG-TOR质粒6 h后SjTOR基因已有转录,至转染24 h时转录水平最高,随后开始降低。Western blot结果显示SjTOR蛋白分子量约53kDa,可被抗FLAG单抗和抗rSjTOR-ED1抗血清识别。结果表明SjTOR蛋白可以在293T细胞中表达。以构建的真核表达质粒pXJ40-FLAG-TOR为基础大量制备DNA疫苗,分别利用肌肉注射法和电导入法免疫昆明系和BALB/c小鼠。在昆明鼠中,和空白质粒对照组相比,用电导入法免疫DNA疫苗诱导了25%的减虫率和28.87%的减卵率;肌肉注射法诱导了0.12%的减虫率和42.38%的减卵率。在BALB/c小鼠中,和空白质粒对照组相比,用电导入法免疫DNA疫苗获得了22.58%的减虫率和32.6%的减卵率;而肌肉注射法获得了20.58%的减虫率和51.34%的减卵率。ELISA结果表明电导入法免疫在昆明系和BALB/c小鼠均诱导了较高水平的特异性IgG抗体,且至剖杀时依然保持较高水平,而肌肉注射法免疫小鼠后特异性IgG抗体水平没有明显升高。电导入法免疫的昆明系和BALB/c小鼠特异性IgG1抗体水平都没有升高,而肌肉注射法免疫后均有显著升高。和对照组相比,各免疫组小鼠的IgG2a抗体水平升高均不明显。液相芯片技术检测免疫组小鼠血清细胞因子水平,结果与PBS对照组相比,肌注免疫和电导入法免疫BALB/c和昆明系小鼠可诱导其血清IL-12和IFN-γ水平升高,IL-4和IL-10水平则降低。结果表明,p XJ40-FLAG-TOR DNA疫苗免疫可能诱导了趋向Th1型的免疫应答。根据SjTOR基因设计和合成了4对siRNA分子。在培养的293T细胞中共转染siRNA和pXJ40-FLAG-TOR质粒,实时荧光定量PCR分析结果显示S1、S2、S3、S4 siRNA分子分别诱导SjTOR基因转录水平降低了70%、63%、3.63%、43%。将S1、S2、S4 siRNA分子通过小鼠尾静脉注射进行体内RNA干扰试验,结果与DEPC H2O组相比,siRNA诱导SjTOR基因的转录水平分别下降84.7%、80.9%和23%。虫荷数和肝脏组织虫卵数分别减少了6.07%和10.06%、24.24%和44.27%、14.02%和63.18%。结果表明,特异的siRNA分子可以在体内干扰SjTOR基因的表达,在小鼠体内诱导显著的减虫减卵率。综上,本文构建的p XJ40-FLAG-TOR真核表达质粒可以在真核细胞中表达,免疫小鼠可以诱导趋向Th1型的免疫反应和显著的免疫保护效果。利用S4 siRNA分子进行的RNA干扰试验结果说明,SjTOR基因可能在日本血吸虫免疫逃避中具有重要作用。