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既往有关趋化因子受体(chemokine receptor)功能的研究主要集中在其介导炎症过程中的作用,近些年的研究已发现在恶性肿瘤中存在多种趋化因子,瘤细胞也表达相应趋化因子受体,它们对肿瘤的发展和演进起着重要而复杂的作用。新近本课题研究小组发现,7次跨膜G-蛋白耦联受体超家族成员甲酰化肽受体(formylpeptide receptor, FPR)在高度恶性的胶质瘤组织中呈选择性表达,且与胶质瘤的恶性级别和微血管密度有关;在其配体fMLF刺激受体活化后,瘤细胞趋化作用增强,细胞内Ca2+动员增加;另外,利用小RNA干扰技术(small interference RNA,siRNA)抑制胶质瘤细胞系U87-MG的FPR表达,瘤细胞增殖速度减缓,促血管生成因子VEGF等分泌减少;这些结果提示恶性胶质瘤细胞中的功能性FPR可能具有更为重要和广泛的生物学作用,并有望成为一种新的治疗胶质瘤的分子生物学靶点。胶质瘤是中枢神经系统最为常见的恶性肿瘤之一,以快速生长、高度侵袭以及丰富的血管化和坏死病灶为主要特征,恶性胶质瘤所表达的FPR在这些生物学行为方面的作用值得深入研究和探讨,尤其是其治疗学意义。我们以往有关胶质瘤FPR表达与功能的研究所使用的材料是细胞系和肿瘤组织,胶质瘤原代细胞在培养过程中是否维持功能性FPR表达尚不清楚。诺帝( Nordy )是本课题研究组基于天然产物去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid, NDGA )的化学结构和效应,自行研制开发的新型抗癌候选药物。初步的实验观察显示诺帝可抑制包括人恶性胶质瘤在内的多种肿瘤细胞的体外生长增殖,对胶质瘤细胞系SHG-44和CHG-5细胞裸鼠移植瘤有明显的抑制生长效应,并且,诺帝还具有抑制胶质瘤细胞趋化因子受体CXCR4和血管内皮生长因子(VEGF)表达的作用。但诺帝的抗肿瘤作用机制是否与抑制FPR功能性表达有关,尚需进一步研究和明确。为进一步深入了解恶性胶质瘤中FPR表达及其功能意义,以及诺帝的抗肿瘤作用及其机制,本实验以人胶质瘤原代及短期传代培养细胞为实验材料,主要观察了胶质瘤培养细胞FPR的表达、其配体激活受体后瘤细胞生长和血管生成因子产生的变化,以及诺帝对FPR表达及其功能的影响。主要研究结果和结论如下:1.体外原代及短期传代培养细胞由于能在一段时间内保持体内细胞的生长特性及功能状况,为了便于研究人恶性胶质瘤细胞FPR表达及功能学意义,我们首先进行了人恶性胶质瘤细胞的原代培养,分别用组织块培养法和胰酶消化法对手术切除的新鲜胶质瘤组织标本进行培养,共培养成功9例,并分别对其进行了初步鉴定。2.采用间接免疫荧光细胞化学染色结合激光共聚焦显微扫描技术检测了人胶质瘤原代及短期传代培养细胞中FPR的表达,结果显示:在高恶性级别(WHOⅢ、Ⅳ级)的5例胶质瘤培养细胞中检测到FPR阳性信号,呈不连续的线性荧光表达于瘤细胞胞膜,而在培养成功的其它低恶性级别(WHOⅠ、Ⅱ级)胶质瘤细胞中未见FPR表达,进一步证实FPR在人恶性胶质瘤组织及细胞中的表达是呈选择性的,与肿瘤的恶性程度有关。3.配体fMLF激活FPR后,培养的胶质瘤细胞生长显著增快,细胞密度增加,且此作用随fMLF活化时间的延长而越发明显,提示表达于恶性胶质瘤细胞的FPR对其配体fMLF的刺激具有反应性,活化后的FPR可促进瘤细胞的体外增殖;利用ELISA技术检测了FPR活化后对胶质瘤细胞VEGF产生的诱导作用,结果显示在10～1000nmol/L浓度范围内fMLF诱导的培养瘤细胞VEGF蛋白的分泌水平均较未刺激组明显增加,且与fMLF的浓度呈剂量依赖性。这些结果表明胶质瘤细胞FPR表达和功能活化与其VEGF的产生密切相关,并可能在恶性胶质瘤的血管生成过程中具有重要作用。4.以100μmol/L诺帝处理后,胶质瘤原代及短期传代培养细胞FPR阳性荧光强度明显减弱;诺帝还可显著抑制fMLF激活FPR诱导的胶质瘤细胞的体外增殖,减少VEGF蛋白的分泌,且此作用具有时间依赖性,提示诺帝对培养的胶质瘤细胞FPR表达及其功能效应具有明显抑制作用,进一步揭示诺帝的抗肿瘤机理。