【摘 要】
:
谷氨酰胺转运蛋白是中枢神经系统中一种重要的中性氨基酸转运蛋白,对谷氨酰胺的跨膜转运十分重要。为了更方便地研究大鼠谷氨酰胺转运蛋白2(SNAT2)在细胞膜上的表达与定位,利用
论文部分内容阅读
谷氨酰胺转运蛋白是中枢神经系统中一种重要的中性氨基酸转运蛋白,对谷氨酰胺的跨膜转运十分重要。为了更方便地研究大鼠谷氨酰胺转运蛋白2(SNAT2)在细胞膜上的表达与定位,利用亚克隆技术将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)构建于SNAT2的C-端,通过菌液PCR、酶切和DNA测序等方法鉴定SNAT2-EGFP融合蛋白表达载体的正确构建;将构建正确的融合蛋白SNAT2-EGFP表达载体瞬时转染人胚胎肾细胞(HEK293Tcells),用Westernblot和激光共聚焦电子显微镜荧光检测技术鉴定SNAT2-EGFP的在细胞膜上的表达与定位。为了深入研究SNAT2的N末端区域对SNAT2于细胞膜上定位的作用,利用定点突变的方法截取SNAT2的前5个氨基酸获得突变体M1G-SNAT2-EGFP,利用限制性酶切、连接等方法将SNAT2于细胞质内的整个N末端即前74个氨基酸截去,获得SNAT2DelN-ter-EGFP。用Westernblot和激光共聚焦电子显微镜荧光检测技术鉴定MlG-SNAT2-EGFP和SNAT2DelN-ter-EGFP的在细胞膜上的表达与定位,运用反转录PCR(RT-PCR)的方法,检测MlG-SNAT2-EGFP和SNAT2DelN-ter-EGFP转录水平的表达。结果表明:SNAT2-EGFP融合蛋白重组质粒在细胞中表达并正确定位于细胞膜上;突变体蛋白MlG-SNAT2-EGFP正常表达并定位于细胞膜上,与SNAT2-EGFP无差异,截去N末端的蛋白SNAT2DelN-ter-EGFP几乎没有表达且不能正常定位于细胞膜上;而SNAT2DelN-ter-EGFPmRNA的表达量与SNAT2-EGFP和SNAT2DelN-ter-EGFP的表达量无明显差别。说明SNAT2的整个N末端区域在翻译水平上对SNAT2的正常表达及于细胞膜上的定位起到了至关重要的作用。
其他文献
针对乙烯裂解炉急冷器SLE套筒内管变型损坏,本文运用压力容器、热力学、流体力学原理对材质、壁厚、工艺参数等进行综合分析,确定SLE内管损坏的主要原因为空蚀(汽蚀)及其伴
芫花酯甲是从中国特有的瑞香科植物芫花中分离得到的瑞香烷型二萜原酸酯类化合物,对多种细胞系均具有较强的抗癌活性,尤其对人肺癌A549细胞(IC_(50) 0.15μM),属于新结构类型的DNA拓扑异构酶Ⅰ(topoⅠ)抑制剂。本研究制备了芫花酯甲PLGA微球,并对其肺靶向性进行了初步研究。本文选择生物可降解的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(dl-lactide-co-glycolide,PLGA,50∶50
为满足特定条件下对风机尺寸和性能的综合要求,对一外形尺寸小、低转速下具有高气动性能的紧凑高效型两级混流风机进行了设计研究和数值分析。首先,通过调整叶轮的结构尺寸
对于静叶可调式大型轴流压缩机,静叶片既需要承受较大的气动力,又需要质轻便于调节,因此选取合适的材料进行研制开发是机组大型化设计需解决的关键技术之一.选取不锈钢、
本文对一种适用于透平领域的防结垢、防腐蚀复合涂层的成分和性能进行了系统研究。研究结果表明,由自牺牲底层、有机抑制中间层和防粘结顶层组成的复合涂层具有优异的防腐
为了将锂离子电池能量密度高和超级电容器功率密度大的优势结合起来,本论文旨在合成一种兼具双电层储能功能的多孔碳与锂离子脱/嵌储能功能的石墨类炭的复合炭材料。通过不同质量比的聚碳硅烷(PCS)和中间相沥青(MP)在320oC共混及不同温度热解、炭化、石墨化处理后得到碳化硅/中间相沥青炭前驱体,将所得的碳化硅/中间相沥青炭前驱体经Cl2刻蚀后,成功制备出网络结构的碳化硅衍生碳/中间相沥青炭复合材料。采用
旋转机械系统中转动部件的不平衡残留量过大将引起系统强烈振动,因此旋转机械系统一般都要进行动平衡。本文从整机系统动平衡的角度,分析旋转机械系统的残留不平衡量与整机
近年来,利用分子自组装原理精心设计和合成有序结构的功能配合物,尤其是配位聚合物或超分子配合物已经成为人们研究的热点。这些配合物往往具有新颖的拓扑结构,并且在光、电、磁
光催化技术是通过半导体催化剂利用光子能量,将许多苛刻条件下发生的化学反应转化为在温和的环境条件下进行的技术。这一技术以其环境友好的特征在能源和环保领域发挥着独特的作用。它的兴起不仅为解决能源危机开辟了新的出路,也为保护绿色环境做出了贡献。但是,作为一种新兴的技术,光催化技术还存在一些不足之处。本文针对光催化效率低、响应区间窄等问题,提出制备2D结构的TiO2纳米片及掺杂钛酸锶(STO)纳米材料,以
PCL长输管线压缩机是我国西气东输重大项目工程为天然气输气管道供给动力的重要核心设备装置,焊接机壳是构成PCL长输管线压缩机的重要定子部件,本文详细阐述了PCL压缩机筒