目的:血清雌二醇的准确定量对女性的生理、病理情况都具有很高的指导意义。本研究以光激化学发光分析的原理为基础,希望建立一种竞争模式的均相免疫分析检测体系,用来定量检测血清中的雌二醇浓度,并对此检测体系进行分析性能评价和临床价值评估。方法:1.血清雌二醇光激化学发光分析方法的初步建立:基于光激化学发光的平台,以单克隆抗人雌二醇抗体包被受体微球,以生物素标记雌二醇或雌三醇,与待测临床样本一起加入到微孔板中孵育,接下来加入链霉亲和素包被的供体微球,以上组成了本研究的检测环境。本研究中首先选出了最佳的反应模式,然后筛选出更适于本实验的竞争性抗原,最后使用棋盘滴定的方法来确定受体微球和生物素化抗原的最适浓度,从而初步建立血清雌二醇光激化学发光分析方法。2.血清雌二醇光激化学发光分析方法的性能评价:在条件优化的基础之上,我们得出拟合方程的校准曲线,评估本检测体系的分析性能,主要包括灵敏度、精密度、准确度、特异性等。并选取了133例临床样本,与IMMULITE 2000分析仪和VIDAS分析仪做相关性分析,从而验证该检测体系的准确度。本研究中使用Graph Pad Prism 7软件绘制剂量-反应曲线及进行相关统计学分析。结果:1.血清雌二醇光激化学发光分析方法的初步建立:将反应模式、竞争性抗原的种类以及受体微球和生物素标记抗原的最佳稀释度进行优化。最终确定最佳反应模式为一步法、最适竞争性抗原为生物素标记的雌三醇抗原、单克隆抗人雌二醇抗体包被受体微球和生物素标记雌三醇抗原的最佳稀释度分别为1:200和1:18×10~4,以上为本检测体系的最佳工作条件。2.血清雌二醇光激化学发光分析方法的性能评价:分析灵敏度和功能灵敏度分别达到了7.16 pg/m L和13.7 pg/m L;批内和批间变异系数均低于15%;回收率介于97.5%至106.8%之间,满足了临床检测的要求;在干扰实验中,胆红素的干扰率为5.4%(高值)、-3.6%(中值)和4.9%(低值),血红蛋白的干扰率为-2.4%(高值)、3.1%(中值)和-5.1%(低值),甘油三酯的干扰率为3.7%(高值)、-2.1%(中值)和4.4%(低值),说明该检测体系有着较强抗黄疸、溶血和脂血干扰的能力;此外,雌二醇与其结构类似物和某些常见生殖激素之间的交叉反应率从1.9%到10.6%不等,说明该检测体系对血清中雌二醇的检测具有高度的特异性。此外,我们的结果表明,该检测体系与IMMULITE 2000系统(y=0.6695x+47.92,r~2=0.843)和VIDAS系统(y=1.099x-821.5,r~2=0.9392)对雌二醇的检测具有高度的一致性。结论:本研究基于光激化学发光分析的原理,成功初步建立了竞争模式定量检测血清雌二醇的新方法。该检测体系是一种均相的测定方法,检测性能优良,具有灵敏度高、特异性强、重复性好、抗干扰能力强等特点,并且临床样本的用量少,有益于患者就医,可用于临床定量检测血清中雌二醇的浓度,并且与一些传统方法和临床常见的方法相比,该检测体系步骤简洁,无需分离和洗涤步骤,这大大缩短了反应时间,且成本较低,易于自动化。在雌二醇检测中具有很好的应用前景,有助于雌二醇诊断试剂盒的研制。