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坚硬黄耆（Astragalus rigidulus Benth.ex Bunge）,为豆科黄耆属多年生草本植物。据《中国植物志》记载,坚硬黄耆产我国西藏东部及南部（江达、那曲、八宿、拉萨、江孜、札达、亚东）。生于海拔3800-5200米的山坡草地或河滩砂砾地。坚硬黄耆在我国藏区作为藏药“萨嘎尔”的基原使用,全草入药,治腹水,止肠痛,根治久病衰弱慢性肾炎浮肿,痈肿疮疖。虽然国内外学者对黄耆属植物的化学成分和药理研究已有较多报道,但是目前尚未见坚硬黄耆的相关研究报道。为了验证坚硬黄耆作为藏药“萨嘎尔”基原的传统功效,探讨其相关作用机制和药效物质基础,本文首次评价了坚硬黄耆的利尿功效,并在此基础上对活性部位—正丁醇萃取部位进行了较系统的化学成分的分离。具体研究内容如下:1.坚硬黄耆的利尿药效评价及机制探讨。本实验采用大鼠生理盐水负荷模型研究坚硬黄耆的利尿作用及其作用机制。筛选排尿合格大鼠,随机分为正常对照组（生理盐水组）,模型组（水负荷模型组）,呋塞米阳性药组,乙醇总提高低剂量组,石油醚高低剂量组,二氯甲烷高低剂量组,乙酸乙酯高低剂量组,正丁醇高低剂量组,水部位高低剂量组。第一次给药后,收集并记录大鼠前6小时尿量,测定尿液中Na+、K+、Cl-、Ca2+的浓度及pH,评价利尿效果。连续给药七天,取血,用酶联反应吸附法（ELISA）测定血清中肾素、血管紧张素Ⅱ、醛固酮、心房钠尿肽,抗利尿激素的含量,western blot法测定肾脏中AQP1、AQP2、AQP3蛋白含量。结果表明:石油醚、乙酸乙酯和正丁醇部位能显著提高大鼠的尿量（P＜0.05,P＜0.01）,且石油醚、乙酸乙酯和正丁醇高剂量组利尿作用均略强于呋塞米阳性药组;总提取物低、石油醚低、乙酸乙酯高、正丁醇低、水低剂量能显著提高大鼠尿量的p H值（P＜0.05,P＜0.01）;正丁醇高低剂量组显著提高大鼠尿液中K+浓度（P＜0.05）,总提高剂量、石油醚高低剂量、乙酸乙酯高剂量、正丁醇高剂量可以显著提高大鼠尿液中Cl-浓度（P＜0.05,P＜0.01）,总提高低剂、石油醚高剂量组大鼠尿液中Ca2+浓度有显著性提高（P＜0.05,P＜0.01）;与模型组相比较,正丁醇高剂量组可以显著降低肾素含量（P＜0.05）,乙酸乙酯高剂量、正丁醇高低剂量组可显著降低大鼠血清中醛固酮含量（P＜0.05,P＜0.01）,乙酸乙酯高剂量、正丁醇高剂量组可显著降低血管紧张素Ⅱ水平（P＜0.05）,乙酸乙酯高剂量组可以显著降低抗利尿激素水平（P＜0.05）;与模型组比较,石油醚部位显著性降低AQP3蛋白表达（P＜0.05）,乙酸乙酯部位显著性降低AQP2蛋白表达（P＜0.05）,正丁醇部位显著性降低AQP1蛋白表达（P＜0.05）。2.坚硬黄耆的化学成分研究。采用大孔树脂、凝胶、反向硅胶、制备型HPLC等色谱技术对正丁醇部位进行了系统分离,运用1D/2D-NMR、MS、UV、IR等等波谱鉴定所分离单体的结构。从坚硬黄耆乙醇提取物中分离鉴定了20个黄酮类化合物和1个脂肪苷,包括8个黄酮醇及其苷类化合物kaempferol（AR1）、kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside（AR8）、quercetin（AR30）、kaempferol-3-O-β-D-6′-acetylglucopyranoside（AR34）,山柰酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-（1→6）-β-D-吡喃葡糖苷（AR58）、5,7,4′-三羟基-3′-甲氧基黄酮醇-3-O-芸香糖苷（AR66）、kaempferol-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-（1→2）-β-D-glucopyranoside（AR68）、quercetin-3-O-β-D-glucoside（AR70）,8个异黄酮及其苷类化合物7-O-methylorobol-4′-O-β-D-glucopyranoside（AR5）、5,7,4′-三羟基异黄酮（AR6）、Mildiside A（AR10）、calycosin（AR21）、樱黄素4′-O-β-D-葡萄糖苷（AR28）、orobot（AR32）、5,7-dihydroxy-4′-methoxyisoflavone-2′-O-β-D-glucopyranosid（AR38）、pratensein-7-O-β-D-glucoside（AR40）,3个异黄烷及其苷类化合物（R,S）-（+）-mucronulatol（AR13）、astriginoside A（AR14）、2′-羟基-3′,4′-二甲氧基异黄烷-7-O-β-D-葡萄糖（AR45）,1个二氢黄酮类化合物naringenin（AR23）及1个脂肪苷类化合物amarantholidoside IV（AR63）。其中AR14为新化合物,而AR5、AR10、AR23、AR28、AR32、AR34、AR38、AR63、AR68等9个化合物为首次在黄耆属中发现,其余化合物则均为首次在坚硬黄耆中分离得到。综上所述,本文采用动物模型验证了藏药坚硬黄耆的利尿活性,其活性部位为石油醚、正丁醇、乙酸乙酯部位。进一步的研究显示,各部位可能通过不同的机制发挥利尿功效:石油醚部位通过调节氯离子、钙离子、AQP3蛋白含量起利尿作用,乙酸乙酯部位主要通过调节氯离子、抗利尿激素、血管紧张素II、醛固酮、AQP2蛋白含量起利尿作用,正丁醇部位通过调节钾离子、氯离子、肾素、血管紧张素II、醛固酮激素、AQP1蛋白含量起利尿作用。对活性部位正丁醇部位的化学成分研究表明,该部位化学成分为异黄酮及黄酮醇类衍生物。本研究结果为藏药坚硬黄耆（萨嘎尔）资源的进一步开发利用奠定了基础数据。