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2003年以来,亚洲很多地区爆发H5N1亚型禽流感疫情,给很多地区带来严重的经济损失。很多国家和地区都有H5N1亚型禽流感病毒感染人事件的报道,据世界卫生组织统计,截至2012年2月世界上已有586人感染,346人死亡,病死率高达59%。H5N1高致病性禽流感病毒跨越种间屏障感染其它哺乳动物的事件也不断发生。当前已经发现猪、狐狸、豚鼠、猴、猫和虎等哺乳动物都能够感染H5N1亚型禽流感病毒。很多研究者都一直关注H5N1亚型禽流感病毒是否会通过不断适应而在人群间引发新的流感大流行。猪在流感病毒的传播与储存中扮演着重要的角色。猪呼吸道内的上皮细胞中同时存在SA-a-2,6Gal(人流感病毒受体)年SA-a-2,3Gal(禽流感病毒受体)。这就意味着猪既可以感染人流感,也可以感染禽流感,甚至可以同时感染两种流感。猪作为流感病毒天然的混合器,存在着人-禽流感病毒在猪体内发生重组的可能性。这种可能性一旦成为事实,则会产生新的能够适应人间传播的流感病毒,从而引起人群间的流感大流行。因此,开展猪源禽流感病毒研究具有重要的科学意义。本研究收集了600余份疑似流感病猪肺部组织,经研磨处理后,在SPF鸡胚上进行病毒的分离,并对收获的鸡胚尿囊液进行血凝试验。结果从600份猪的样品中分离得到一株具有血凝性阳性的病毒株,将此病毒株经过SPF鸡胚增殖,提取病毒RNA,利用A型流感病毒通用引物进行核酸PCR扩增,通过1%琼脂糖凝胶电泳鉴定后,确定所分离毒株为流感病毒。为进一步确定所分离流感病毒的亚型,使用H5N1亚型流感病毒特异性鉴定引物进行PCR扩增,1%琼脂糖凝胶电泳,可见明显扩增的目的条带,进一步鉴定所分离毒株为H5N1亚型流感病毒。以GenBank数据库中收录的H5N1亚型禽流感病毒各片段基因序列为模板,应用Primer50引物设计软件设计H5N1亚型禽流感病毒的全基因测序引物,并委托北京华大生物科技有限公司合成,应用全基因测序引物对该株病毒全基因测序,最后进行基因序列分析。系统进化分析后发现,该株毒的大部分基因与A/Jiangsu/1/2007(H5N1)株进化树距离较近,其分支落在2000年～2010年我国人体内分离到的H5N1亚型流感病毒的分支内。对该株毒的血凝素蛋白(HA)的氨基酸分析,该猪源禽流感病毒的HA裂解位点处存在着由多个碱性氨基酸组成的连接肽(PLRERRRKRG),与高致病性禽流感病毒的分子特征相一致。进一步证明了,猪体内的禽流感病毒有传播给人类的可能。本研究为猪源H5N1AIV的监测、研究和防制提供初步的试验依据,并对动物流行病学和公共卫生学具有重要的意义。