牙种植修复是牙缺失修复的主要手段,在临床上应用广泛。钛合金是一种无生物活性的惰性材料,常作为牙种植体植入牙槽骨中,或作为外伤骨折后的固位钉植入体内,这种合金材料与骨组织具有良好的生物相容性,但这种合金材料和骨组织的成分截然不同,弹性模量亦不同。钛合金体植入骨中与骨是一种机械性嵌合,没有化学性骨结合力。许多研究对钛合金植入体进行表面处理,例如钛基体表面电解微孔,使骨组织能长入基体表面微孔内,但该方法产生的骨化学结合力并不强。广泛应用于临床的纯钛与钛合金(Ti-6Al-4V)种植体材料中存在金属离子蓄积的潜在危险,易引起宿主免疫反应和造成界面应力屏障等问题,影响种植体的长期稳定性和寿命。钛合金表面涂覆生物活性材料能有效的改善钛合金的生物惰性问题,是近几年的研究热点。涂层技术是对金属基体材料表面采用不同的工艺处理方法,例如等离子喷涂法等,在植入物表面喷涂具有生物活性的材料。生物陶瓷涂层是常用的植入物涂层材料,形成涂层后使原材料保持原有的强度和韧性等优良性能,同时又将生物陶瓷的高度生物相容性和优良的生物活性等优点附加在植入体上。最常用的钛种植体表面涂层有羟基磷灰石(hydroxyapatite, HA)、氟磷灰石、p-磷酸三钙和生物活性玻璃。羟基磷灰石涂层的结晶度较低,使其在体液中易发生早期降解,从而降低了置入物的使用寿命。涂层结构不致密,植入人体后,不能有效阻止生理组织液的渗出,造成涂层与金属界面的腐蚀及有害金属离子的溶出。很多研究表明,钛种植体表面羟基磷灰石颗粒剥脱下来后引起种植体周围组织的免疫细胞,如单核/巨噬细胞、中性粒细胞等的聚集,免疫细胞接触或吞噬羟基磷灰石颗粒后释放细胞因子,引起局部组织的无菌性炎症,最终导致种植体的松动脱落。这些特点限制了羟基磷灰石涂层的广泛使用。生物玻璃类材料,常作为涂层材料通过喷涂技术喷涂到钛种植体表面,该材料能与骨组织形成紧密的结合,其结合面的强度甚至高于骨组织和钛合金材料的结合强度。生物活性玻璃的有些成分可与软组织相互作用,甚至引导血管化。所以近来生物活性玻璃越来越多地应用于生物工程方面。硅酸二钙(dicalcium silicate, C2S)在耐火材料、水泥、防腐隔热涂层材料等领域得到了广泛的研究,是一种重要的生物活性玻璃。硅酸二钙主要含有CaO-SiO2成分。硅酸二钙作为涂层材料喷涂于植入体表面后,将这种材料在模拟体液中浸泡后,涂层表面很快形成“富硅层”,之后快速产生丰富的碳酸羟基磷灰石(carbonate-containing hydroxyapatite, CHA)层,羟基磷灰石结构与骨组织非常接近,这表明硅酸二钙涂层具有较好的生物活性。研究发现,等离子喷涂硅酸二钙涂层有较好的优点。硅酸二钙颗粒喷涂到钛植入体表面后,涂层表面粗糙且有微孔,此特点增加了涂层表面与周围骨组织的结合面积,是生物涂层材料的基本条件。此外,对硅酸二钙涂层进行机械性能分析后发现该涂层材料与钛金属的结合强度较高。相关的研究发现,硅酸二钙能刺激成骨细胞和间充质干细胞的增殖和分化,并促进成骨效应相关基因的表达。细胞学实验发现将成骨细胞接种在硅酸二钙涂层表面后,成骨细胞能正常攀附生长、增殖和分化。硅酸二钙能刺激成骨细胞和间充质干细胞的增殖和分化,并促进成骨相关基因的表达。有学者将钛颗粒混入硅酸二钙颗粒中形成复合的涂层,混入的钛颗粒有效降低了硅酸二钙的降解,增强了涂层的耐用性同时保持了原有硅酸二钙的生物活性。目前,多数研究集中在硅酸二钙涂层或水泥的研究上。硅酸二钙作为涂层材料或骨替代材料植入体内后,与细胞直接接触,其直接接触的方式对细胞的毒性作用尚无报道。硅酸二钙作为一种陶瓷材料植入体内后是否刺激宿主的免疫反应也未见报道。生物活性玻璃与不同的组织接触其组织反应不同,例如,45S5生物玻璃与腹腔巨噬细胞共培养促进了细胞因子TNF-α的表达。人滑膜细胞与45S5共培养时也出现了TNF-α的表达增加。而另外一种生物活性玻璃58S减弱了鼠巨噬细胞的炎症反应,降低了炎症因子TNF-α的表达,所以了解生物活性玻璃与炎症反应的关系非常重要。羟基磷灰石作为一种相对较为安全的生物材料,植入体内后其颗粒会刺激周围免疫细胞分泌炎症因子,导致局部的无菌性炎症。因此,了解硅酸二钙与炎症反应的关系也非常重要。本课题针对生物材料的潜在促炎作用以及潜在的安全性风险,考虑到硅酸二钙的潜在应用前景,将硅酸二钙与三种细胞直接接触,观察其细胞毒性。将硅酸二钙颗粒与单核细胞共培养,探讨了硅酸二钙颗粒及涂层刺激对免疫细胞分泌炎症因子的影响。本研究目的是对硅酸二钙颗粒生物安全性作初步评价,并进一步探讨硅酸二钙颗粒对人单核细胞分泌炎症细胞因子以及其成骨效应,制备硅酸二钙涂层,以了解硅酸二钙的临床应用前景。第一章：硅酸二钙颗粒对人外周血单核细胞、人单核细胞系THP-1、人成骨细胞系MG-63的细胞毒性作用制备硅酸二钙颗粒,对硅酸二钙颗粒和羟基磷灰石颗粒进行表征分析。如颗粒扫描电镜分析、颗粒表面元素分析、颗粒粒径分析及比表面积分析。扫描电镜可见两种材料的颗粒大小和形状不同。表面元素分析可见硅酸二钙颗粒中含有Ca、Si、O等元素；羟基磷灰石颗粒Ca5(PO4)3(OH)含有Ca、Si、P、O等元素,与材料应含有的元素相符。X-射线衍射分析可见样品的X-射线衍射峰与标准品衍射峰相吻合,说明样品的物相较纯。激光衍射粒径分析见硅酸二钙颗粒的粒径范围是3～22μm,羟基磷灰石是1.9～80μm。两种材料的比表面积分析可见两种材料的比表面积不同。通过计算比表面积比,台盼蓝染色,CCK-8和细胞凋亡检测不同比表面积比(10/1,5/1和1/1)颗粒对免疫细胞的细胞毒性作用。在本研究中选择了人外周血单核细胞,THP-1以及MG-63作为研究对象。单核细胞是首先与生物材料接触的细胞,种植体涂层脱落的颗粒或者骨水泥植入体内后,单核细胞首先聚集在这些材料所在的部位,单核细胞吞噬这些颗粒后可能出现细胞毒性,导致细胞死亡或凋亡。硅酸二钙作为种植体涂层材料或者骨替代材料,主要与骨细胞发生相互作用,促进成骨细胞增殖分化。所以在本实验中我们选择了最常用的MG-63作为实验对象。实验结果证实硅酸二钙颗粒对人外周血单核细胞无明显细胞毒性作用。CCK-8分析结果可见,硅酸二钙和羟基磷灰石对三种细胞均无明显的细胞毒性作用,材料与细胞共培养24 h和48 h后均有85%以上细胞为活细胞。在实验结果中,人外周血单核细胞与硅酸二钙共培养24 h后,SAR 10：1的细胞存活率为95.38±3.79%,细胞毒性分级为1级；SAR 5：1的细胞存活率为93.88±4.67%,细胞毒性分级为1级：SAR 1：1的细胞存活率在98.05±1.39%,细胞毒性分级为1级。人外周血单核细胞与羟基磷灰石颗粒共培养24 h后,SAR10：1的细胞存活率为90.00+7.61%,细胞毒性分级为1级；SAR 5：1的细胞存活率为94.93±2.08%,细胞毒性分级为1级；SAR 1：1的细胞存活率在91.73±3.74%,细胞毒性分级为1级。人外周血单核细胞与硅酸二钙共培养48 h后,SAR 10：1的细胞存活率为88.48±11.79%,细胞毒性分级为1级；SAR 5：1的细胞存活率为88.17±9.57%,细胞毒性分级为1级；SAR 1：1的细胞存活率在92.81±18.52%,细胞毒性分级为1级。而人外周血单核细胞与羟基磷灰石共培养48 h后,SAR 10：1的细胞存活率为91.94±24.37%,细胞毒性分级为1级；SAR 5：1的细胞存活率为95.95±6.50%,细胞毒性分级为1级；SAR 1：1的细胞存活率在95.36±23.85%,细胞毒性分级为1级。共培养24 h时硅酸二钙组的细胞存活率均高于羟基磷灰石的存活率,而共培养48 h后硅酸二钙组的细胞存活率低于羟基磷灰石组,但所有实验组细胞存活率均在85%以上。THP-1与硅酸二钙颗粒共培养24 h后,SAR 10：1的细胞存活率为89.10±13.02%,细胞毒性分级为1级；SAR 5：1的细胞存活率为84.44±12.86%,细胞毒性分级为1级；SAR 1：1的细胞存活率在86.85±20.41%,细胞毒性分级为1级。THP-1与羟基磷灰石颗粒共培养24 h后,SAR 10：1的细胞存活率为99.23±27.40%,细胞毒性分级为1级；SAR 5：1的细胞存活率为97.14±7.88%,细胞毒性分级为1级；SAR 1：1的细胞存活率在91.44±28.56%,细胞毒性分级为1级。人单核细胞系THP-1与硅酸二钙颗粒共培养48 h后,SAR 10：1的细胞存活率为92.03±3.68%,细胞毒性分级为1级；SAR 5：1的细胞存活率为98.49±7.00%,细胞毒性分级为1级；SAR 1：1的细胞存活率在109.52±3.06%,细胞毒性分级为0级。THP-1与羟基磷灰石颗粒共培养,48 h后,SAR 10：1的细胞存活率为105.24±2.39%,细胞毒性分级为0级；SAR 5：1的细胞存活率为110.01±6.95%,细胞毒性分级为0级；SAR 1：1的细胞存活率在103.46±2.45%,细胞毒性分级为0级。提示低剂量的硅酸二钙颗粒和羟基磷灰石颗粒能刺激THP-1细胞增殖。MG-63与硅酸二钙颗粒共培养24 h后,SAR 10：1的细胞存活率为125.57±8.90%,细胞毒性分级为0级；SAR 5：1的细胞存活率为119.59±11.32%,细胞毒性分级为0级；SAR 1：1的细胞存活率在108.36±3.06%,细胞毒性分级为0级。MG-63与羟基磷灰石颗粒共培养24 h后,SAR 10：1的细胞存活率为120.09±9.15%,细胞毒性分级为0级；SAR 5：1的细胞存活率为110.06±5.43%,细胞毒性分级为0级；SAR 1：1的细胞存活率在119.73±15.20%,细胞毒性分级为0级。MG-63与硅酸二钙颗粒共培养48 h后,SAR 10：1的细胞存活率为87.05±1.35%,细胞毒性分级为1级；SAR 5：1的细胞存活率为95.88±3.16%,细胞毒性分级为1级；SAR 1：1的细胞存活率在93.86±3.30%,细胞毒性分级为1级。MG-63与羟基磷灰石颗粒共培养48 h后,SAR 10：1的细胞存活率为84.50±4.00%,细胞毒性分级为1级；SAR 5：1的细胞存活率为88.60±6.14%,细胞毒性分级为1级；SAR 1：1的细胞存活率在95.59±4.06%,细胞毒性分级为1级。提示硅酸二钙和羟基磷灰石颗粒在24 h内对成骨细胞具有促进细胞增殖的效应,而48 h后细胞增殖有一定变化,但细胞存活率仍在85%以上。流式细胞术检测结果显示不同比表面积比(SARs)的硅酸二钙颗粒/羟基磷灰石颗粒对人外周血单核细胞凋亡的影响。人外周血单核细胞与硅酸二钙／羟基磷灰石共培养后,SAR 10：1的细胞凋亡率为分别为6.16±0.77%和5.29±0.48%。硅酸二钙引起较大的细胞凋亡比例,与对照组比较有统计学意义(P<0.05),但硅酸二钙组与羟基磷灰石组两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。SAR 5：1的细胞凋亡率为分别为5.49±0.48%和7.25±1.48%。羟基磷灰石引起较多的细胞凋亡比例,与对照组比较有统计学意义(P<0.05),但硅酸二钙组与羟基磷灰石组两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。SAR 1：1的细胞凋亡率分别为4.96±0.079%和4.32±1.30%。硅酸二钙组/羟基磷灰石组与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05),硅酸二钙组与羟基磷灰石组两组间比较差异亦无统计学意义(P>0.05)。THP-1与硅酸二钙/羟基磷灰石共培养后,SAR 10：1的细胞凋亡率为分别为8.88±0.77%和6.03±1.45%。硅酸二钙引起较大的细胞凋亡比例,与对照组比较有统计学意义(P<0.05),硅酸二钙组与羟基磷灰石组两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。SAR 5：1的细胞凋亡率为分别为5.83±0.72%和6.32±0.75%。硅酸二钙/羟基磷灰石与对照组比较均无统计学意义,硅酸二钙组与羟基磷灰石组两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。SAR 1：1的细胞凋亡率为分别为5.98±0.48%和4.46±1.53%。硅酸二钙组/羟基磷灰石组与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05),硅酸二钙组与羟基磷灰石组两组间比较差异亦无统计学意义(P>0.05)。MG-63与硅酸二钙/羟基磷灰石共培养后,SAR 10：1的细胞凋亡率为分别为7.80±0.24%和7.41±0.65%。硅酸二钙组/羟基磷灰石组与对照组比较有统计学意义(P<0.05),硅酸二钙组与羟基磷灰石组两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。SAR 5:1的细胞凋亡率为分别为5.64±0.54%和6.52±0.52%。羟基磷灰石组与对照组比较差异有统计学意义(P>0.05),硅酸二钙组与羟基磷灰石组两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。SAR 1：1的细胞凋亡率为分别为5.45±0.61%和6.35±0.48%硅酸二钙组/羟基磷灰石组与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05),硅酸二钙组与羟基磷灰石组两组间比较差异亦无统计学意义(P>0.05)。从细胞凋亡率来看,各实验组的细胞凋亡率在4-9%之间,与CCK-8的实验结果基本一致。从统计学分析来看,SAR 1：1引起的细胞凋亡率最低,均与对照组细胞凋亡率比较差异无统计学意义。同时基于以往的研究和临床实际应用时生物材料的释放量,我们选择SAR 1：1作为后续实验用剂量。因为植入种植体或组织工程材料释放到周围组中的量相对较小。研究小剂量的材料颗粒对局部组织的影响更有实际意义。本部分实验结果如下：·成功制备了硅酸二钙颗粒。·对硅酸二钙的表征进行分析。·硅酸二钙颗粒与外周血单核细胞/THP-1共培养24 h、48 h后细胞存活率在85%以上,细胞毒性分级为1级。·硅酸二钙颗粒与MG-63共培养24 h时,细胞存活率在100%以上,细胞毒性分级为0级。硅酸二钙颗粒与MG-63共培养48 h时,细胞存活率在85%以上,细胞毒性分级为1级。·硅酸二钙颗粒与外周血单核细胞/THP-1/MG-63共培养时,细胞凋亡率在4%-9%,与CCK-8的结果一致。·硅酸二钙颗粒与外周血单核细胞/THP-1/MG-63共培养时,未见大量的细胞凋亡发生。·硅酸二钙颗粒是相对较安全的生物材料。第二章：硅酸二钙颗粒的体外促炎作用和成骨效应已知很多种植体涂层材料或骨替代材料具有潜在的促进炎症因子表达的效应,例如羟基磷灰石。羟基磷灰石由于其较好的生物活性和生物相容性,被认为是相对安全的生物材料。但是,羟基磷灰石颗粒从种植体表面脱落可造成周围组织的无菌性炎症。羟基磷灰石颗粒与单核细胞相互接触导致炎症因子的表达,例如肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor alpha, TNF-α)和基质金属蛋白酶(metalloproteinases, MMPs)。骨替代材料如双相磷酸钙,聚甲基丙烯酸甲酯(polymethylmethacrylate, PMMA)等均促进炎症因子的表达。硅酸二钙作为具有广泛应用前景的骨替代材料和种植体涂层材料,尚无研究报道其潜在的促进炎症因子表达的作用。硅酸二钙的成骨效应往往集中在硅酸二钙涂层以及硅酸二钙离子浸提液,尚无有关硅酸二钙颗粒的成骨能力研究。在本部分我们探讨硅酸二钙颗粒对免疫细胞的潜在促炎效应和成骨效应。通过将硅酸二钙颗粒与免疫细胞THP-1共培养后,采用荧光定量RT-PCR法和酶联免疫吸附实验检测炎症相关基因和蛋白的表达。细胞外基质降解是评价生物材料安全性的关键环节,是评估炎症细胞对生物材料的反应。为了探索硅酸二钙颗粒/羟基磷灰石颗粒对THP-1细胞基质金属蛋白酶类以及肿瘤坏死因子-a等的影响,本实验应用荧光定量RT-PCR法分析基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9(MMP-2和MMP-9)及基质金属蛋白酶抑制剂-2、基质金属蛋白酶抑制剂-1 (TIMP-2和TIMP-1)的表达情况。按实验分组培养细胞6 h、24 h后收集细胞,提取总RNA,逆转录为cDNA,通过荧光定量PCR对基因表达进行相对定量分析。本实验设计中脂多糖组和酵母多糖组为阳性对照组。6h后,硅酸二钙组和羟基磷灰石组均维持低水平的MMP-2和MMP-9(P>0.05)。而此时,阳性对照组(脂多糖组和酵母多糖组)均表达高水平的MMP-2和MMP-9(P<0.05)。24 h后,硅酸二钙组和羟基磷灰石组MMP-2和MMP-9的mRNA表达水平显著上调,但硅酸二钙组的MMP-9上调水平低于羟基磷灰石组,差异具有统计学意义(P<0.05)。而MMP-2的表达在硅酸二钙组和羟基磷灰石组之间差异无统计学意义(P>0.05)。阳性对照组以及LPS+颗粒组均表达高水平的MMP-2和MMP-9。硅酸二钙颗粒/羟基磷灰石颗粒对LPS诱导细胞炎症因子的表达无调节作用。本研究分析了TIMP-2和TIMP-1的表达情况。6h后其表达无明显变化,阳性对照组以及LPS+颗粒组均表达低水平的TIMP-2和TIMP-1。24 h后,阳性对照组以及LPS+颗粒组的TIMP-2和TIMP-1的表达明显降低(P<0.05)。硅酸二钙组和羟基磷灰石组的TIMP-1表达水平显著降低(P<0.05)。尽管TIMP-2的表达水平明显降低,但与对照组相比差异无统计学意义。对TNF-α mRNA的表达水平进行分析,结果显示,6h和24 h时,脂多糖和酵母多糖均引起高水平的TNF-α表达。6h时,硅酸二钙组和羟基磷灰石组均未引起明显的TNF-α表达变化。24 h后,硅酸二钙组和羟基磷灰石组均上调TNF-α表达(P<0.05),但与羟基磷灰石组相比,硅酸二钙组的上调幅度较小,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)基于qRT-PCR的结果,酶联免疫吸附实验(ELISAs)法检测24 h后硅酸二钙颗粒/羟基磷灰石颗粒对MMPs及其抑制剂TIMPs分泌的影响。与对照组相比,硅酸二钙组/羟基磷灰石组的MMP-2和MMP-9的分泌均上调,差异具有统计学意义。与RT-PCR的结果趋势相同。MMP-2的分泌在硅酸二钙组与羟基磷灰石组之间的差异无统计学意义(control:1.55±1.16 ng/mL, C2S:15.84±3.5 ng/mL, HA: 13.71±2.76 ng/mL, Fig.2-3 A)。但是,羟基磷灰石组对MMP-9的上调作用是硅酸二钙组的2倍,差异具有统计学意义(control:2.66±0.47 ng/mL, C2S:15.16±1.81 ng/mL, HA:36.02±1.69 ng/mL, P<0.05)。硅酸二钙颗粒/羟基磷灰石颗粒均对LPS激活细胞的MMP-2和MMP-9分泌无调节作用。接下来,检测了各实验组TIMP-2和TIMP-1的分泌水平。TIMP-2的浓度在硅酸二钙组和羟基磷灰石组均没有明显变化。TIMP-1是MMP-9重要的抑制剂,在硅酸二钙组和羟基磷灰石组均观察到明显的分泌下降(P<0.05),羟基磷灰石颗粒对TIMP-1的下调作用更强(P<0.05, control:4.13±0.50 ng/mL, C2S:1.71±0.39 ng/mL, HA:0.96±0.20 ng/mL)± MMP:TIMP比值的平衡在骨代谢平衡过程中发挥重要的作用。所以,在本实验中评价了MMP:TIMP比值。硅酸二钙组和羟基磷灰石组的MMP-2：TIMP-2比值和MMP-9:TIMP-1值均上调。羟基磷灰石组比硅酸二钙引起更强的MMP-9:TIMP-1比值不平衡。本研究检测了各组TNF-α的浓度。羟基磷灰石对TNF-α的上调作用是硅酸二钙的2倍(P<0.05, control:100.07±35.51 pg/mL, C2S:228.44±39.68 pg/mL, HA: 419.80±89.94 pg/mL),脂多糖和酵母多糖是很强的TNF-α促进剂。硅酸二钙颗粒和羟基磷灰石颗粒对LPS引起的TNF-α分泌无调节作用.本部分实验结果：·通过结果显示THP-1细胞与硅酸二钙／羟基磷灰石共培养24 h后,MMP-2、MMP-9和TNF-α的表达增加,而TIMP-2和TIMP-1表达降低。与羟基磷灰石相比,硅酸二钙对MMP-9表达上调和TIMP-1表达下调的影响较小。·硅酸二钙组和羟基磷灰石组的MMP:TIMP比值均增加,而羟基磷灰石组的增加幅度更大,与硅酸二钙组相比具有统计学意义。与羟基磷灰石比较,硅酸二钙组对TNF-α表达影响较小。硅酸二钙对MMP-9和TIMP-1分泌的调节作用更弱,提示与羟基磷灰石相比,硅酸二钙具有更弱的炎症效应和基质溶解效应。·硅酸二钙组和羟基磷灰石组均对LPS激活THP-1细胞炎症相关因子的表达无明显影响。·硅酸二钙组和羟基磷灰石组均上调成骨细胞OPG基因及下调RANKL表达,降低RANKL/OPG比值,两种材料具有相似的成骨效应,但两者比较差异不具有统计学意义。由上研究结果可见,硅酸二钙可能比羟基磷灰石相对安全,引起的促进炎症效应较弱。硅酸二钙和羟基磷灰石均对LPS激活细胞炎症因子的表达无调节作用。硅酸二钙和羟基磷灰石具有相似的成骨效应。第三章：硅酸二钙涂层对鼠巨噬细胞系RAW264.7的细胞毒性研究硅酸二钙常作为生物涂层材料使用。本研究制备硅酸二钙／生物玻璃45S5钛片涂层,对两种涂层的表征进行分析。如颗粒扫描电镜分析、颗粒表面元素分析、颗粒粒径分析。扫描电镜可见两种涂层的表面形貌不同；表面元素分析可见硅酸二钙涂层(Ca2SiO4)中含有Ca、Si、O等元素；羟基磷灰石涂层Ca5(PO4)3(OH)中含有Ca、Si、P、O等元素,与材料应含有的元素相符。台盼蓝染色法和CCK-8法检测了两种涂层对免疫细胞的细胞毒性作用。在本研究中选择了鼠巨噬细胞RAW264.7作为研究对象。巨噬细胞是贴壁细胞,与种植体涂层可以直接接触。本研究将RAW264.7与硅酸二钙涂层共培养,通过细胞毒性检测试剂盒检测硅酸二钙涂层对264.7的细胞毒性作用。实验结果显示硅酸二钙涂层／生物玻璃45S5涂层对RAW264.7无细胞毒性,属毒性分级1级。本部分小结：·成功制备了硅酸二钙涂层/生物玻璃45S5涂层。·对硅酸二钙涂层/45S5涂层的表征进行分析。·硅酸二钙颗粒与鼠巨噬细胞系RAW264.7共培养24 h、48 h,细胞存活率在85%以上,细胞毒性分级为1级,临床上可认为没有细胞毒性。综上,本研究证明硅酸二钙颗粒及涂层是一种生物安全性较高的生物材料,其体外促进炎症因子分泌的能力可能比羟基磷灰石弱,提示其作为骨替代材料或种植体涂层材料的潜在应用前景。