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■研究背景结直肠癌(Colorectal cancer CRC)是常见消化道恶性肿瘤。迄今，结直肠癌的确切发病机制仍不十分清楚，但目前普遍认为结直肠癌发病是一个涉及多基因、多步骤的复杂过程。NGX6基因是中南大学肿瘤研究所分子遗传室克隆的一个侯选抑瘤基因(基因登陆号：AF188239)，前期研究发现NGX6在结直肠癌组织中表达明显下降；它能够延缓细胞周期的进程；抑制肿瘤增殖和种植瘤的生长；并能抑制肿瘤血管的生成，下调VEGF的表达；使结肠癌细胞体外侵袭能力下降，同时恢复肿瘤细胞间隙；并负调控beta-catenin/Wnt通路。且前期基因芯片研究发现NGX6能使MAPK(mitogen-activated protein kinases，MAPKs)通路相关的两个基因：MADD(MAP-kinase activating death domain)；Rhoc(Ras homolog gene family,member C)的表达下调三倍以上，而这两个基因主要是与ERK(P42/P44MAPK)通路和SAPK/JNK通路有关。所以本课题在前期工作的基础上，从NGX6对信号传导的影响来探讨其抑制肿瘤增殖、侵袭、转移的分子机制。并且重点研究MAPK通路中ERK(P42/ P44MAPK)通路和SAPK/ JNK通路中关键分子P-JNK和P-ERK在结直肠癌中的表达及临床意义，并进一步探讨NGX6对ERK/MAPK通路和SAPK/JNK通路影响和对相关核转录因子的调控。■P-JNK和P-ERK在结直肠组织芯片中的表达本文在336个点阵的结直肠组织芯片上，利用免疫组化检测P-JNK和P-ERK蛋白表达，并进一步分析蛋白阳性表达与结直肠组织临床病理特征的关系。结果发现P-JNK和P-ERK蛋白在癌组织较粘膜的表达明显增高。且P-JNK在结直肠癌组织的阳性表达与性别、分化程度、Duke’S分期、远处转移相关，P-ERK蛋白阳性表达在结直肠癌组织中与分化程度相关，在癌旁粘膜中与远处转移相关。然而，P-JNK和P-ERK的蛋白表达之间没有相关性。■NGX6对SPAK/JNK和ERK/MAPK通路的影响以三组结肠癌细胞株(HT-29、pcDNA3.1(+)/HT-29、pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29)为研究对象。采用Western Blot、免疫荧光及免疫细胞化学方法检测NGX6对JNK、P-JNK、ERK、P-ERK蛋白质表达和核移位的影响。结果证实：过表达NGX6基因能抑制HT-29细胞中JNK1/2的活化和核移位，使P-JNK1在胞浆聚集，入核减少；但却并不能抑制ERK1/2的活化和核移位。■NGX6对核转录因子AP-1(c-Jun、c-fos)、Ets-1的影响通过Western Blot检测转染NGX6基因后HT-29细胞的核转录因子AP-1(c-Jun、c-fos)、Ets-1的蛋白质表达均明显下调：提示NGX6可以抑制MAPK通路的下游转录因子的表达。予以信号通路抑制剂分别抑制ERK及JNK信号通路后发现ERK及JNK信号通路均可调控c-Jun、Ets-1表达，但c-fos主要受ERK通路的调控，JNK通路只能部分抑制抑制c-fos表达。说明NGX6可能是通过SPAK/JNK通路来抑制核转录因子的表达。荧光素酶报告质粒检测系统检测NGX6对结肠癌SW620细胞系中MAPK通路的关键分子AP-1的活性的影响。发现瞬时转染了NGX6的SW620细胞系中AP-1的活性明显下降。■NGX6对细胞周期调控蛋白CyclinD1的影响Western Blot检测转染NGX6基因对细胞周期调控蛋白CyclinD1的蛋白质表达的影响；荧光素酶报告质粒检测系统检测NGX6对结肠癌SW620细胞系中CyclinD1活性的改变。结果显示NGX6能够抑制CyclinD1蛋白质表达并下调CyclinD1转录活性。综上所述：本研究证实了SPAK/JNK通路和ERK/MAPK通路中关键分子P-JNK和P-ERK在结直肠癌中活化增强，而NGX6可以通过SPAK/JNK通路负调控结直肠癌的核转录因子及抑制AP-1的转录活性，并通过抑制具有AP-1结合位点的CyclinD1来延缓细胞周期的进程，从而抑制结直肠癌细胞的增殖和侵袭转移。