成纤维细胞对人工皮肤黑素瘤模型中MV3生长的影响

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目的:在去表皮的真皮(DED)组织模型的基础上,观察成纤维细胞(FBs)与黑素瘤细胞在不同接种比例下的生长情况,从而期望在体外寻找FBs与MV3侵袭性之间的关系。  方法:采用组织块贴壁法处理健康小儿包皮,用10%DMEM低糖培养基进行FBs原代培养,获得人皮肤FBs细胞;分别将FBs、MV3传至第3代,将FBs和MV3制成细胞悬液按不同比例(FBs:MV3分别为5:1、3:1:;1:1)接种于培养瓶中混合培养,同时设MV3和FBs单独培养作对照,观察FBs和MV3的生长情况;制备人去表皮的真皮(DED);将培养至第3代的FBs、MV3制成细胞悬液,按3:1、2:1、1:1的比例接种于DED表面,采用液下培养和空气—液面培养相结合的方式进行培养,2周后取培养的DED分别行苏木素-伊红(HE)染色、行波形蛋白(Vimentin)和S-100、HMB45免疫组化组织双染、以只接种MV3的DED做阴性对照,并做基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)免疫组化染色,PBS为空白对照。  结果:FBs和MV3在5:1、3:1接种比例下FBs生长占优势,在1:1接种比例下MV3生长占优势;HE染色显示在3:1接种比例下DED表面未见细胞生长;在2:1接种比例下DED表面见细胞呈单层生长,部分管腔可见细胞浸润生长;在1:1接种比例下 DED表面见细胞呈单层生长;2:1接种比例下行 Vimentin和S-100、HMB45双染均可见细胞周围及管腔红色颗粒沉积;只接种MV3的DED MMP-2、TIMP-1免疫组化结果均可见棕黄色颗粒沉积在细胞周围。  结论:成纤维细胞对人工皮肤黑素瘤模型中MV3的生长起抑制作用。
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