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目的:甘丙肽受体1(GalR1)属于G蛋白偶联受体,甘丙肽信号通路在痛觉调节中发挥重要作用。本研究探讨脊髓背角甘丙肽信号通路在慢病毒介导的DREAM基因沉默治疗CCI大鼠疼痛中的作用,以进一步阐明DREAM调控疼痛的可能机制。方法:选择健康雄性SD大鼠24只,随机分为四组(n=6):即RNA干扰组、空白载体组、单纯CCI组和正常对照组。鞘内置管前1天,造模前1天及CCI后2、4、6、8、10、12、14天测定痛阈(包括PWTL和PWMT)。RNA干扰组和空白载体组于CCI后第7天开始经微导管分别注入pKCSHR-Puro/ GFP- DR- EAM慢病毒10μl+NS5μl和空白载体10μl+NS5μl,连续注射3天。于CCI后第14天,取L4-5脊髓节段,其中一部分迅速放入冻存管置于液氮罐冷冻备用,另一部分用石蜡包埋、切片,采用荧光显微镜下观察GFP在大鼠脊髓背角的表达,Realtime PCR测定腰段脊髓DREAM基因、GalR1基因mRNA的表达,Western Blot测定腰段脊髓内DREAM蛋白、GalR1蛋白的表达。结果:1.大鼠痛阈的变化:手术同侧(左侧)热痛阈和机械痛阈测定结果:置管前1天、CCI前1天的基础痛阈无差异(P＞0.05)。与正常对照组相比,CCI后2天开始,RNA干扰组、空白载体组及单纯CCI组的各个时间点热痛阈和机械痛阈均显著降低(P＜0.01)。RNA干扰组治疗后较CCI后6天痛阈升高(P＜0.01),而治疗后同时间点RNA干扰组较空白载体组及单纯CCI组痛阈亦升高(P＜0.01)。而手术对侧(右侧)各时间点痛阈值无差异(P＞0.05)。2.CCI后14天,RNA干扰组大鼠腰段脊髓背角神经细胞可见大量绿色荧光,GFP表达阳性,提示慢病毒载体转染成功。3.Realtime PCR实验结果:RNA干扰组CCI后14天时脊髓背角DREAM基因mRNA的表达明显弱于其他各组(P＜0.05),其他各组间无显著差异(P＞0.05)。RNA干扰组GalR1基因mRNA的表达明显弱于空白载体组、单纯CCI组(P＜0.05),但高于正常对对照组(P＜0.05),空白载体组和单纯CCI组表达无差异(P＞0.05)。4.Western Blot实验结果:RNA干扰组的DREAM蛋白表达水平明显下调(P＜0.05),而其他各组(空白载体+CCI组、单纯CCI组、正常对照组)间DREAM蛋白表达无差异(P＞0.05)。与正常对照组相比,RNA干扰组、空白载体组和单纯CCI组的GalR1蛋白表达水平显著上调(P＜0.05);与空白载体组及单纯CCI组比较,RNA干扰组的GalR1蛋白表达显著下调(P＜0.05);空白载体组及单纯CCI组间无差异(P＞0.05)。结论:1.DREAM参与调节GalR1基因和GalR1蛋白的表达。2.GalR1在慢病毒介导的DREAM沉默治疗CCI大鼠疼痛的机制中可能发挥重要作用。