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目的:研究首乌藤粗多糖对小鼠免疫功能的影响,选择合适的方法对提取的粗多糖进行分离纯化,利用化学方法、现代波谱及色谱技术对所获得的均一多糖进行化学结构的初步研究,以期为首乌藤多糖的开发利用和临床应用提供技术方法和科学依据。 方法:(1)采用正常小鼠模型和腹腔注射环磷酰胺所致的小鼠免疫抑制模型,以生理盐水为空白对照组,香菇多糖片为阳性对照组,灌服首乌藤多糖,观察对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响及溶血素和溶血空斑形成的影响;(2)采用95%乙醇回流提取除去脂溶性小分子物质,然后沸水提取、醇沉和真空干燥得首乌藤粗多糖,经乙醇分级醇沉,15%三氯乙酸脱蛋白,透析处理后,进一步用DEAE 52-纤维素阴离子交换柱层析和Sephacryl S-300凝胶过滤柱层析进行分离纯化;(3)采用化学分析方法对所得到的首乌藤均一多糖样品进行理化性质分析,并通过高效凝胶渗透色谱(HPGPC)、气相色谱(GC)、紫外光谱(UV)及红外光谱(IR)等方法对样品进行纯度鉴定、分子量测定、单糖组成及初步结构分析。 结果:(1)与空白对照组相比,首乌藤多糖组可显著提高正常小鼠和免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬百分率和吞噬指数,促进溶血素和溶血空斑的形成,其中以0.2 g/kg首乌藤多糖剂量组作用为最佳;(2)DEAE 52-纤维素柱分离纯化得到3个首乌藤多糖组分,即SWTPA、SWTPB和SWTPC,Sephacryl S-300凝胶柱进一步分离纯化得到 6 个首乌藤多糖组分,将其分别命名为 SWTPA-1、SWTPB-1、SWTPB-2、SWTPB-3、SWTPC-1和SWTPC-2;(3)经常压凝胶柱色谱法和高效液相凝胶色谱法确定 6 个样品均为均一组分,理化性质显示均为白色絮状粉末,纯度较高,不含有淀粉、酚类化合物、大分子的多肽、蛋白质和核酸,除SWTPA-1、SWTPC-1和SWTPC-2外,样品中均含有糖醛酸类化合物,6个多糖样品分子量分别为9162、56314、44502、37278、40558和61000。气相色谱法测定样品的单糖组成,显示均是由不同糖残基构成的杂多糖,以阿拉伯糖和半乳糖为主要组成成分,紫外光谱显示样品在260 nm和280 nm处均未见蛋白质、多肽和核酸的特征吸收峰,经红外光谱测定 6 种多糖样品均具有多糖类物质的特征吸收峰。 结论:药理实验研究表明首乌藤多糖具有明显的免疫增强作用,值得深入研究;摸索出了一套适合首乌藤多糖的分离纯化方法且有效实用;对分离得到的 6种均一多糖组分进行结构的初步分析,为首乌藤多糖的进一步开发和应用提供技术支持。