金属多酚胶囊电化学免疫分析法超灵敏检测EBV抗体

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背景与目的鼻咽癌(NPC)是一种起源于鼻咽粘膜的上皮癌,在东亚和东南亚尤为流行。据报道,中国年龄标准化发病率为3例/10万人,五年总生存率为61%。EB病毒已被证实为NPC的主要的致病因子,因此有效的EBV人群筛查在早期NPC诊断中起着重要作用。使用PCR分析血浆EBV DNA被认为是检测EBV的有效方法,但是由于缺乏标准化的检测方法,其检查结果在实验室之间存在明显差异。最近,抗EBV抗体的血清学检测已发展成为NPC的常规筛查之一。然而,基于ELISA的传统抗体检测方法灵敏度低、特异性低。因此,目前迫切需求一种高度灵敏、特异和稳定的抗EBV抗体检测方法。我们提出了一种基于金属-多酚胶囊(sMPC)的电化学免疫分析法,用于对鼻咽癌的一种生物标志物——EB病毒衣壳抗原抗体(EBVCA-IgA)的超灵敏检测。方法金属-多酚胶囊(sMPC)的制备简单,整个过程可以在30分钟内完成。将金属离子和单宁酸(TA)混合,立即与微米大小的碳酸钙(Ca CO3)微球孵育。由于多酚与金属离子的高亲和力,金属-多酚(MP)网络形成并沉积在Ca CO3微球上。然后将溶液的p H值调节到5.0使模板溶解。将软胶囊和空心胶囊离心收集,与抗人Ig A孵育形成检测金属探针。当sMPC在电极表面形成经典的夹心结构后,加入HNO3将其溶解,释放出的金属离子可以作为信号分子。阳极溶出伏安法(ASV)是最广泛使用的电化学技术之一,每个sMPC中都含有大量的金属离子,因此ASV可以检测到放大的电流信号,从而实现对肿瘤生物标志物的超灵敏检测。结果与结论:本研究结果表明,空心、软质的sMPC在电极表面自由移动,因此它们有更多的机会与相应的分析物结合,与固体sMPC相比,本课题组设计的sMPC具有更好的分析识别效率。同时,微型sMPC包含大量金属离子,这有助于信号放大。在此基础上,大大提高了设计策略的灵敏度,并允许检测飞摩尔浓度的分析物。实验中,对EB病毒衣壳抗原抗体(EBVCA-Ig A)的超低检测限为0.46 f M,也可用于实际样品分析。据我们所知,这是第一个基于sMPC的电化学策略报告。该方法具有制备方便、灵敏度高、选择性好等优点,在病毒相关疾病的现场诊断中具有广阔的应用前景。此外,sMPC的表面很容易被DNA适配体、多肽或抗体等其他识别分子修饰,因此该方法可以很容易地扩展到其他分析物的检测,为临床诊断中其他生物标志物的检测提供了很大的潜力。
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