目的:ANKRD22属于锚蛋白(ANK)重复序列家族,具有4个重复的锚蛋白基序,在肺癌、乳腺癌、胰腺癌等多种肿瘤中表达增高,但其功能、分子机制以及与肿瘤发生发展的关系有待进一步深入研究。我们前期研究发现ANKRD22在结直肠癌和结直肠癌干细胞中表达增加,提示ANKRD22可能参与了结直肠癌进展和结直肠癌干细胞特性的调控。本研究通过基因富集分析、制备特异性抗ANKRD22单克隆抗体和免疫组化染色等方法,以进一步了解ANKRD22在结直肠癌中的表达意义,初步探讨其潜在应用价值。方法:首先用基因富集分析(GSEA)方法对GEO数据库的566例结直肠癌组织检测数据进行了ANKRD22 mRNA表达水平与结直肠癌相关临床参数相关性分析;然后以ANKRD22/pCMV6-XL5为模板扩增人ANKRD22基因全长ORF序列,亚克隆至原核细胞表达载体pET-42a(+)中,经测序鉴定后,将重组表达质粒转化Rosetta DE3大肠杆菌,用异丙基硫代-β-D-半乳糖(IPTG)进行诱导表达,细菌裂解上清液过Ni2+柱获得纯化的GST-ANKRD22融合蛋白;用ANKRD22重组蛋白免疫Balb/c小鼠,以制备鼠源性单克隆抗体;最后用免疫组化染色方法检测了包含完整随访资料的112例结直肠癌组织芯片的ANKRD22表达状况,并进行了 ANKRD22表达水平与结直肠癌患者临床病理特征相关性分析。结果:1、GSEA分析发现ANKRD22在结直肠癌中较正常结直肠组织表达水平明显增加;具有较高ANKRD22表达的患者总体生存率和预后均较好;2、通过原核细胞重组表达ANKRD22重组蛋白,经动物免疫、细胞融合和杂交瘤细胞筛选等过程获得了 4株抗人ANKRD22特异性的鼠源性单克隆抗体,通过Westerm blot和抗体特异性阻断实验验证了制备的抗ANKRD22抗体具有较高的特异性;3、通过对组织芯片中的112例结直肠癌组织用抗ANKRD22抗体进行免疫组化染色,结果示52例结直肠癌组织阳性表达ANKRD22,阳性率46.4%(52/112),ANKRD22表达水平与p53表达和β-catenin表达呈正相关(p均<0.05)。结论:我们利用原核细胞重组表达系统成功表达了 ANKRD22重组蛋白,通过小鼠免疫和杂交瘤筛选获得了 4株特异性的鼠源性抗ANKRD22单克隆抗体;结直肠癌免疫组化染色结果提示ANKRD22功能可能与p53和Wnt/β-catenin通路有关。ANKRD22可能是一个潜在的结直肠癌预后标志。