论文部分内容阅读
目的:近年来子宫内膜癌发病率不断上升,严重影响女性健康,目前子宫内膜癌治疗手段仍以传统的手术治疗为主,辅以放疗、化疗、内分泌治疗等,毒副作用大,对患者的生活质量及恢复造成不良影响。分子靶向治疗药物具有特异性强,毒副作用小等优势,成为目前肿瘤治疗界的研究热点。S-亚硝基谷胱甘肽(GSNO)已被证实对多种恶性肿瘤有治疗作用。本课题拟通过体内外实验,探究GSNO对子宫内膜癌细胞生长的抑制作用,并对其可能的作用机制进行初步探讨,为子宫内膜癌的分子靶向治疗提供新的思路。方法:采用CCK8法检测GSNO对子宫内膜癌细胞HEC-1-A以及ishikawa的生长抑制作用,通过HE染色法观察GSNO对细胞形态学的改变,利用流式细胞周期检测法、Western Blot法等对其作用机制进行初步探讨,并通过裸鼠皮下成瘤法进一步验证GSNO在体内的作用效果。结果:(1)GSNO对子宫内膜癌细胞具有明显的生长抑制作用,并且其抑制效率随着浓度的增加和作用时间的延长而增加,在浓度为2.0mmol/L及作用24小时后,抑制效率明显提高,同时其对子宫内膜癌细胞的抑制效果明显强于正常二倍体细胞,差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)HE染色结果显示:GSNO使子宫内膜癌细胞呈现出凋亡形态,细胞贴壁不良,胞质皱缩,细胞核固缩、碎裂。(3)GSNO明显降低子宫内膜癌细胞内STAT3的磷酸化水平,并通过抑制细胞周期关键蛋白CDK2、CDK4、cyclinA2以及cyclinD的表达,促进细胞周期抑制蛋白p21的表达,使肿瘤细胞发生G1/S期停滞。而对NF-κB通路p65、IκBα的高磷酸化以及IKK-α的高表达无明显效果。(4)裸鼠皮下成瘤实验结果显示:相比于生理盐水对照组,接受GSNO治疗的裸鼠,皮下瘤体大小明显小于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),且治疗过程中裸鼠各项生理机能完好,未出现明显异常。结论:(1)GSNO对子宫内膜癌细胞具有生长抑制作用,这一作用效果呈剂量-时间依赖性,且对正常二倍体细胞的抑制作用明显弱于子宫内膜癌细胞,表现出很大程度的特异性。(2)GSNO通过调节细胞周期关键蛋白的表达,使子宫内膜癌细胞发生G1/S期阻滞,从而使肿瘤细胞生长受到抑制。(3)GSNO能够降低子宫内膜癌细胞内STAT3的磷酸化水平,进而逆转JAK-STAT通路的异常激活,抑制肿瘤细胞的增殖失控。(4)GSNO对NF-κB通路的异常激活无明显作用,不是其抑制子宫内膜癌细胞生长的机制。(5)GSNO在体内同样具有抑制子宫内膜癌细胞生长的作用,且不对正常细胞、组织、器官产生损害,毒副作用小,是理想的分子靶向治疗药物。