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目的:1.研究妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)患者血清对脐静脉内皮细胞(HUVEC)分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响,探讨VEGF与妊娠肝内胆汁淤积症发病的关系.2.检测中药川芎嗪对VEGF表达的影响,并为川芎嗪用于预防和治疗妊娠肝内胆汁淤积症提供理论依据.方法:1.用胶原酶灌注法行原代HUVEC培养,Giemsa染色行形态学观察,用鼠抗人第Ⅷ因子抗体进行内皮细胞鉴定及纯度分析.2.选取ICP患者22例及正常孕妇13例,抽取静脉血清,追踪随访至妊娠结局,统计两组临床特征.随机选取各12例进行以下实验.3.MTT法检测不同浓度的ICP患者血清及正常孕妇血清(0％、5％、10％、15％、20％)对内皮细胞活力的影响;检测不同浓度的川芎嗪(0 μg/ml、25 μg/ml、50 μ g/ml、100 μ g/ml、200 μ g/ml)对20％ICP患者血清孵育的内皮细胞活力的影响,并与20％正常孕妇血清对照.4.ELISA法检测不同浓度的ICP血清及正常孕妇血清(10％,20％)作用不同时间(12小时、24小时、36小时)对内皮细胞分泌的VEGF蛋白的影响.5.用不同浓度的川芎嗪(0 μ g/ml、25 μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml)干预20％ICP患者血清孵育的内皮细胞,用ELISA及免疫细胞化学技术分别检测细胞培养上清及胞浆中的VEGF蛋白量,并与20％正常孕妇血清对照.结果:1.MTT实验结果显示,随着血清浓度的升高,ICP组内皮细胞OD<,490>值逐渐减低,而正常孕妇组内皮细胞OD<,490>值逐渐增高.两组5％浓度组OD<,490>值与0％浓度组比较P>0.05;10％、15％、20％浓度组OD<,490>值与0％浓度组比较P<0.05.随着川芎嗪浓度的升高,内皮细胞OD<,490>值逐渐增加(P<0.05),到100 μg/ml达到高峰.2.ELISA实验结果显示:随着血清浓度的增加,作用时间的延长,ICP组内皮细胞分泌VEGF逐渐减少(P<0.05),而正常孕妇组内皮细胞分泌VEGF逐渐增多(P<0.05).3.ELISA及免疫细胞化学实验结果显示随着川芎嗪药物浓度的增加,内皮细胞分泌的VEGF蛋白逐渐增多(P<0.05),到100 μg/ml达到高峰.4.ICP组与正常孕妇组临床特征比较:ICP组新生儿体重显著低于正常孕妇组,羊水粪染程度显著高于正常孕妇组,差异有统计学意义.结论:1. ICP患者血清对血管内皮细胞具有毒性作用,使细胞生长受限,活细胞数量减少,并呈浓度依赖性.2.ICP患者血清对血管内皮细胞分泌VEGF蛋白有抑制作用,此作用呈浓度,时间依赖性.ICP患者血清对内皮细胞的毒性作用可能是由于抑制了内皮细胞分泌VEGF蛋白所致.3.川芎嗪对ICP患者血清损伤的内皮细胞有保护作用,此作用随药物浓度增加逐渐增大,到100 μg/ml达到高峰.4.川芎嗪可以拮抗ICP患者血清抑制内皮细胞分泌VEGF的作用,此作用随药物浓度增加逐渐增大,到100 μg/ml达到高峰.5.川芎嗪对ICP患者血清损伤的内皮细胞的保护作用可能是由于促进了内皮细胞分泌VEGF所致.