我国优势基因型弓形虫Wh3株诱导人单核巨噬细胞THP-1偏移极化的研究

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目的研究我国优势基因型弓形虫Wh3株,感染人单核巨噬细胞后,诱导巨噬细胞偏移分化情况。方法实验过程中分6 h和24 h两个大组,每组各包含对照组,RH组,Wh3组和ME49组。获取弓形虫Wh3株,RH株和ME49株,感染PMA刺激分化成人巨噬细胞的THP-1细胞,感染后6 h和24 h,分别收集培养上清和巨噬细胞。采用ELISA法检测各组巨噬细胞培养上清中,巨噬细胞分泌的IL-6,IL-10,TNF-α和TGF-β等细胞因子浓度。提取各组巨噬细胞中总RNA,逆转录成cDNA,通过荧光定量PCR检测巨噬细胞M1/M2极化的相关基因iNOS,Arginase-1,以及TNF-α,IL-12,TGF-β,IL-10等细胞因子mRNA转录水平。提取各组巨噬细胞中总蛋白质,通过Western blotting检测巨噬细胞iNOS和Arginase-1蛋白表达水平。结果ELISA检测培养上清中细胞因子含量,发现ME49株感染巨噬细胞6h和24 h后,IL-6和TNF-α含量最高(P<0.01);RH虫株感染后IL-10和TGF-β含量最高(P<0.01),弓形虫Wh3株感染后培养上清细胞因子含量介于RH株和ME49株之间(P<0.01)。感染ME49株弓形虫的巨噬细胞24 h后iNOS转录水平及感染6 h和24 h后TNF-α和IL-12转录水平均升高(P<0.001);RH株感染6 h和24 h后巨噬细胞的IL-10和Arginase-1的转录水平,及感染6 h后TGF-β转录水平升高(P<0.05);同样发现弓形虫Wh3株各基因的转录水平介于RH株和ME49株之间。通过Western-blotting测定iNOS,Arginase-1的表达量,分析后也得到相似的结果。在感染Wh3株和ME49株弓形虫24 h后,iNOS蛋白表达增高(P<0.0001),而在感染RH株24 h后,Arginase-1表达量升高(P<0.001)。结论弓形虫Wh3株感染后,巨噬细胞表现出介于M1和M2之间的极化方向,且更接近于M2极化方向。
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