【摘 要】
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蛋白质化学修饰技术作为一种改善蛋白质化学性质的方法,已受到越来越多的重视。本文通过不同的合成方法制备8种不同分子量、不同结构的PEG及MPEG(分子量分别为2000,4000,5000,600
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蛋白质化学修饰技术作为一种改善蛋白质化学性质的方法,已受到越来越多的重视。本文通过不同的合成方法制备8种不同分子量、不同结构的PEG及MPEG(分子量分别为2000,4000,5000,6000,7000,10000,20000),分别对胰蛋白酶和胆固醇酯酶进行化学修饰研究,对修饰酶的酶活、热稳定性、Km值等相关参数进行了测定。 研究发现,在单链PEG修饰剂的制备方法中,PEG-SS法及叔丁醇钾法产率较高,且后处理方法简单,而钠萘法合成步骤多、后处理工序复杂;在双链PEG修饰剂的合成方面,经实验比较,最终选定经对硝基苯酚氯甲酸酯(NPC)合成2MPEG-Lys。 胰蛋白酶经过不同分子量修饰剂修饰后,其活性均得到较好的保留;而热稳定性测定数据表明酶经修饰后,热稳定性明显得到提高,且热稳定性仅与酶分子整体空间结构有关;用考马斯亮蓝对修饰前后胰蛋白酶的自水解速率测定也表明:酶经修饰后其自水解明显受到抑制。 胆固醇酯酶经修饰后酶活均有不同程度的损失,但酶活损失程度与修饰剂分子量及结构有关,仅有双链PEG修饰胆固醇酯酶可以保持较高的酶活;修饰酶热稳定性的测定数据也证明了这一趋势。 修饰酶Km值的测定表明Km值仅与酶分子整体结构有关,在活性位点不被修饰、整体结构不发生较大改变的情况下即可以保持较高的对底物的表观亲和力。
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