柴郁安神汤对PCPA致失眠小鼠脑内5-HT、NE、γ-GABA含量的影响

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目的:  1.建立戊巴比妥钠睡眠小鼠模型,观察不同剂量柴郁安神汤对小鼠睡眠潜伏期和睡眠持续时间的影响,从而观察其改善睡眠的作用,确定助眠效果最合理的用药剂量;  2.建立PCPA(对氯苯丙氨酸)失眠小鼠模型,通过检测失眠小鼠脑内5-HT(5-羟色氨)、NE(去甲肾上腺素)及γ-GABA(γ-氨基丁酸)含量,观察柴郁安神汤对与失眠相关的神经递质含量的影响,探讨柴郁安神汤治疗失眠的作用机制,为临床广泛应用柴郁安神汤治疗失眠提供实验依据。  方法:  1.采用腹腔注射戊巴比妥钠的方法,制备睡眠小鼠模型;采用腹腔注射PCPA方法制备小鼠失眠模型;  2.实验室条件下喂养1周后,将小鼠分为两大组,第一大组50只,随机分为5小组,分别为空白组、阳性对照组、中药低剂量组、中药高剂量组;按照0.2mL/10g体积予空白组小鼠蒸馏水灌胃,柴郁安神汤组给予25%、50%、100%浓度的柴郁安神汤浓煎液(1g/ml)灌胃,阳性对照组予浓度为1.3%的艾司唑仑水溶液灌胃,灌胃1周。在最后一次灌胃1小时后,将戊巴比妥钠45mg/kg(在预实验中,引起全部小鼠睡眠的最小剂量)给予小鼠腹腔注射。观察小鼠的翻正反射消失时间及睡眠持续时间;第二大组90只小鼠,随机分为空白组、模型组、阳性对照组、中药低剂量组、中药中剂量组与中药高剂量组,除空白组外,其余组小鼠全部造模,造模方法为连续两日腹腔注射PCPA混悬液,造模成功后,统一灌胃6天,空白组予0.2ml/10g体积蒸馏水灌胃,其余组灌胃方法同实验一;于实验第8d各组灌胃1小时后取材,检测不同小组小鼠脑内5-HT、NE及γ-GABA含量,进行统计学分析并比较各组差异。  结果:  1.柴郁安神汤对戊巴比妥钠小鼠睡眠潜伏期及睡眠持续时间的影响。①模型小鼠翻正反射消失时间的实验结果提示:艾司唑仑与中药均有缩短模型小鼠入睡时间的作用:中药中剂量组、中药高剂量组与阳性对照组相比,无显著性差异(P>0.05),中药低剂量组与阳性对照组,存在显著差异(p<0.05),中药低剂量组与空白组比较,无显著性差异(P>0.05)。②模型小鼠睡眠时间的实验结果提示:艾司唑仑与中药均有延长小鼠睡眠持续时间的作用:中药高、中、低剂量组与阳性对照组比较,结果无显著性差异(P>0.05),说明中药高剂量组、中药中剂量组、与中药低剂量组均有延长小鼠睡眠持续时间的作用,与阳性对照组无显著差异。  2.柴郁安神汤对PCPA致失眠小鼠脑内5-HT、NE及γ-GABA含量的影响;实验结果提示:模型组与空白组小鼠脑内5-HT、NE及γ-GABA含量的比较,具有极显著性差异(P<0.01);阳性对照组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组,与模型组比较,具有极显著性差异(P<0.01);阳性对照组与中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组相比,具有极显著性差异(P<0.01)中药中剂量组与阳性对照组比较,具有极显著性差异(P<0.01)。  结论:  1.采用PCPA连续两日腹腔内给药的造模方法,可成功制备对氯苯丙氨酸小鼠失眠模型;  2.柴郁安神汤连续灌胃,能显著减少戊巴比妥钠所致睡眠小鼠的翻正反射消失的时间并可使其睡眠时间延长,提示柴郁安神汤具有缩短翻正反射消失时间并有延长睡眠持续时间的作用;  3.PCPA是通过显著降低小鼠脑内5-HT及γ-GABA的含量,升高NE的含量使其睡眠-觉醒周期改变,导致失眠;  4.当超过正常剂量一倍时,则生物利用率降低,临床效果不理想,若剂量再增加,可能会导致动物中毒或死亡。
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