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卡波济肉瘤相关疱疹病毒（Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV）是近年来在卡波济肉瘤（Kaposi’s sarcoma,KS）组织中发现的一种γ2型疱疹病毒，并且已成为HIV-1感染阳性患者较常出现的一种肿瘤。本研究的目的是对KSHV的六个潜伏与增殖相关基因进行克隆表达和表达产物的多克隆抗体制备与鉴定。 1．相关基因的克隆及测序鉴定 根据KSHV基因序列组成，设计六对引物并引入酶切位点，用PCR方法扩增六个目的基因，分别是ORF73C、K8.1、ORF65、ORF26、ORF73N和ORF59。将目的基因克隆至原核表达质粒，构建成六个重组质粒。重组质粒的核酸序列分析结果显示，克隆的目的基因ORF73C、K8.1、ORF65、ORF26、ORF73N和ORF59与GenBank中登记的基因序列同源性分别是99％、100％、100％、98％、98％和99％。 2．目的基因的原核表达与表达产物的多抗制备 将其中五个重组质粒分别转化大肠杆菌BL21（DE3）和BL21（RP），经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）显示有三个重组质粒表达目的蛋白，即ORF73C、ORF26和ORF65蛋白。目的蛋白经相关处理后免疫小鼠，制备抗目的蛋白多抗。运用Western blot检测，证实两个多抗有效，即抗ORF73C和抗ORF26多抗。 3．KSHV潜伏感染ELISA检测方法的初步建立 优化ORF73C重组蛋白的表达条件，使蛋白主要以可溶状态出现在诱导表达菌上清中。借助于pGEX系统融合蛋白谷胱甘肽S-转移酶（GST），运用Glutathione Sepharose 4B亲和层析柱纯化ORF73C重组蛋白，获得纯化的目的蛋白ORF73C，并进一步免疫小鼠获得抗ORF73C抗体。采用ECL Western blot方法检测抗ORF73C抗体与BCBL-1细胞中KSHV LANA蛋白的反应特性。结果显示，该抗体与LANA反应呈阳性。进一步以浓缩的KSHV病毒颗粒为被检抗原，以ORF73C抗体为已知抗体，初步建立了KSHV潜伏感染的ELISA检测方法。