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目的:研究肺康饮的药物血清对人肺癌细胞(NC-H446)形态学、增殖与细胞周期和凋亡率,及其相关基因B细胞白血病/淋巴瘤-2基因(bcl-2)和p53蛋白的影响,探讨肺康饮治疗肺癌的作用及机制。
方法:研究对象由中国医科大学细胞室提供的人非小细胞肺癌NC-H446细胞株,本院实验中心细胞室保存。通过给正常大鼠灌胃制备肺康饮的药物血清,设为含药血清组,正常大鼠血清设为空白血清组,研究不同血清对肺癌细胞的影响。
(1)制作肺癌细胞的超薄切片,在透射电镜下观察肺癌细胞的形态学改变;
(2)采用咪哇比色分析法(MTT)检测不同浓度药物血清对肺癌细胞增殖的影响;
(3)采用流式细胞仪检测药物血清对肺癌细胞周期和凋亡率的影响
(4)应用免疫组化方法,检测p53、bcl-2蛋白表达情况。所有数据均用SPSS12软件进行统计学处理。
结果:
1.培养NC-H446人肺癌细胞电镜观察,细胞核、核膜清晰可见,胞质内可见Mi、rER、Ri结构,细胞表面Vi。药物血清处理24 h,细胞在电镜下可见细胞核染色质浓淡不均,异染色质凝聚在核周边,可见核仁,细胞膜起皱呈出芽状。药物血清处理48 h,可见凋亡小体形成,小体内Mi、rER、外膜清晰,形成多个凋亡小体。
2.与空白血清组比较,肺康饮药物血清作用12h既有凋亡峰(7.43%)出现,24h达高峰为26.10%,而对照组仅为6.71%,药物血清作用后,G0/G1细胞明显减少, S期细胞增多5%、10%和15%浓度组的含药血清对肺癌细胞的增殖均有明显的抑制作用(P<0.05),其中10%含药血清组的抑制率显著强于5%含药血清组(P<0.05),但15%含药血清组与10%含药血清组比较无显著性差异(P>0.05)
3.与空白血清组比较,含药血清组肺癌细胞周期缩短和凋亡率明显增高,其差异具有极显著性(P<0.01)。
4.免疫细胞化学研究结果:p53主要定位在细胞核,呈棕黄色颗粒,部分细胞浆也有淡染,中药组呈强阳性。bcl-2主要表现为胞浆着色呈棕黄色颗粒,中药组反应强度下降。而空白对照组未见阳性表达。
5.流式细胞仪分析结果:p53、bcl-2在NC-H446人肺癌细胞株中都有不同程度的表达,药物血清作用后,p53表达增强,bcl-2表达降低,随着作用时间延长,表达变化增强。
结论:
1.肺康饮药物血清具有抑制人肺癌(NC-H446)细胞株增殖作用。
2.肺康饮药物血清对人肺癌细胞(NC-H446)有显著的缩短细胞周期和诱导凋亡的作用,这可能是其治疗肺癌的重要机制之一。
3.肺康饮药物血清能促使凋亡小体的形成,说明此方药抑制肿瘤的作用是通过诱导肿瘤细胞凋亡来实现的。
4.肺康饮药物血清能使p53表达增强,bcl-2表达降低,随着作用时间延长,表达变化增强,这可能是其发挥诱导肺癌细胞凋亡的分子机制之一。