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目的乳腺癌是较为普遍的一种恶性肿瘤,目前数十种与乳腺癌发病、发展及转移相关的基因已经被鉴定。本研究拟观察在乳腺癌MCF-7细胞中,当MT2A基因表达沉默时,乳腺癌细胞的繁殖及乳腺癌转移关联基因的表达变化。方法利用生物信息学分析金属硫蛋白MT2A的序列特点设计并合成干扰载体sh RNA-MT2A,转染乳腺癌MCF-7细胞获得MT2A基因沉默型细胞株。利用观察MT2A基因沉默型乳腺癌细胞的繁殖变化和黏附基质的能力变化,通过RT-PCR、western blot检测FGF-1、Twist、转铁蛋白、AOP-1和过氧化还原酶6等5个基因在转录和翻译水平上的变化。结果1设计并合成三条shRNA-MT2A干扰载体,通过实验最终确定一条干扰载体用于后续研究。2通过脂质体转染技术将sh RNA-MT2A转入乳腺癌MCF-7细胞株,得到MT2A基因沉默型细胞株,并通过荧光显微镜观察、半定量PCR技术和western blot技术对MT2A的表达情况作了鉴定。3在MT2A基因缺失时,癌细胞繁殖变化,发现乳腺癌细胞MCF-7繁殖速度降低,与基质的黏附能力增强。4实时定量PCR结果显示FGF-1和Twist蛋白在MT2A缺失的乳腺癌细胞中表达水平变化不大。5转铁蛋白在MT2A基因沉默的乳腺癌细胞中转铁蛋白的m RNA含量上升。6研究发现细胞内的MT2A沉默后,AOP-1和过氧化还原酶6的m RNA水平均上升,但是AOP-1基因表达上调水平高于过氧化还原酶6基因。7 western blot实验分析显示在MT2A基因沉默的乳腺癌细胞中FGF-1和Twist蛋白水平没有发生显著变化,而转铁蛋白、AOP-1和过氧化还原酶6三种蛋白在细胞中的含量出现上升。8构建MT2A与β-domain过表达细胞株,结果证实MT2A与β-domain的过表达不影响乳腺癌细胞的繁殖,而β-domain过表达促进细胞线粒体中细胞色素c氧化酶6B2亚基(CYP6B2)表达量上调。结论本研究证实MT2A基因沉默型乳腺癌细胞繁殖速度变慢、与基质的黏附能力增强;因为MT的主要功能是调节金属离子代谢和抗氧化,所以MT2A基因沉默影响到了铁离子调控蛋白转铁蛋白,也影响到了抗氧化蛋白AOP-1和过氧化还原酶6和细胞色素c氧化酶6B2亚基。