养心草水提乙酸乙酯部位止血和抗炎活性的筛选

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目的本课题旨在将养心草的乙酸乙酯部位进行单体的分离,在此基础上筛选出止血和抗炎的活性成分,为养心草止血和抗炎的药效提供实验和理论依据。方法1.采用硅胶和中低压高压液相色谱技术,分离养心草的乙酸乙酯部位的化学成分,将化合物理化性质和核磁共振氢谱、核磁共振碳谱及质谱等结合起来鉴定得到的化合物结构。2.止血药效的筛选:毛细管法检测养心草的乙酸乙酯部位分离的单体对小鼠凝血时间(CT)的影响;仪器法检测分离的单体对小鼠凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT),凝血酶时间(TT)的影响。3.抗炎药效的筛选:MTT法检测养心草的乙酸乙酯部位分离的单体对RAW264.7小鼠单核巨噬细胞和经LPS刺激的RAW264.7小鼠单核巨噬细胞的影响;硝酸还原法检测养心草的乙酸乙酯部位分离的单体对经LPS刺激的RAW264.7小鼠单核巨噬细胞释放NO的影响;ELISA法检测养心草的乙酸乙酯部位分离的单体对经LPS刺激的RAW264.7小鼠单核巨噬细胞释放TNF-a, IL-1B, IL-6的影响。结果1.养心草的乙酸乙酯部位分离的单体为没食子酸、对羟基苯甲酸、原儿茶酸、香草酸、咖啡酸、5,7-二羟基色元酮、槲皮素、山奈酚、木犀草素。2.养心草的乙酸乙酯部位分离的酚酸类化合物即没食子酸、香草酸和木犀草素止血效果,且没食子酸(300ug/mL),香草酸(lOO ug/mL)和木犀草素(100、30ug/mL)止血效果最优。3.养心草的乙酸乙酯部位分离的原儿茶酸(p<0.05)、香草酸(p<0.05)、咖啡酸(p<0.05)、槲皮素(p<0.05)、木犀草素(p<0.05)具有抗炎的作用。结论1.养心草的乙酸乙酯部位分离的酚酸类化合物即没食子酸、香草酸、木犀草素止血的可能机制是通过激活内源性凝血系统和外源性凝血系统中的多种凝血因子起作用的,即缩短凝血时间(CT)、活化部分凝血活酶(APTT)时间和凝血酶(TT)时间起作用。2.养心草的乙酸乙酯部位分离的原儿茶酸、香草酸、咖啡酸、槲皮素、、木犀草素抗炎的可能机制是抑制NO, TNF-α、IL-1β、IL-6细胞因子产生。
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