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目的:结直肠癌是一种“现代病”–与现代生活方式和饮食类型有关。大量流行病学,特别是移民流行病学研究显示,结直肠癌的发病与能量摄入过多、肥胖、体力活动减少有关。就病因学而言,起决定作用的因素是环境因素而非遗传因素,结直肠癌是一个生活方式相关癌。在发展中国家,人们越来越多的采用与癌相关的生活方式包括体力活动减少,饮食“西方化”导致的肥胖是结直肠癌发病率快速上升的重要原因。据预测,我国的结直肠癌发病率和死亡率在今后很长一段时期内将稳步上升,成为最常见、发病率上升最快的恶性肿瘤之一。脂肪组织分泌雌激素、胰岛素和胰岛素样生长因子,还分泌不同的生物活性物质,称作脂肪因子,其中最引人注目的是瘦素（Leptin）和脂联素（Adiponectin）。下丘脑分泌的脑源性神经营养因子（Brain-derived neurotrophic factors,BDNF）作用于白色脂肪组织调节瘦素的合成和分泌,称为BDNF/Leptin轴,酪氨酸激酶受体B（Tyrosine kinase receptor B,Trk B）是BDNF的特异性受体。瘦素的血清浓度与身体脂肪总量和总体重直接相关。我们的前期实验针对瘦素、瘦素受体在结直肠癌组织和正常肠管组织中的表达情况进行了研究,发现瘦素和瘦素受体与结直肠癌密切相关。本研究采用Western blot的方法检测结肠癌细胞株DLD-1中瘦素和BDNF的表达,进一步分析瘦素和BDNF与结直肠癌的关系,同时用酶标仪MTT法观测瘦素和BDNF与结直肠癌细胞增殖生长的关系,探讨可能影响结直肠癌发生、发展的因素,试图为结直肠癌的诊断和治疗提供新的方法和理论依据。方法:1人结肠癌细胞株DLD-1和正常人肠上皮细胞株HIEC均由中山大学肿瘤防治中心（华南肿瘤学国家重点实验室）赠送。将其置于含10%胎牛血清的DMEM培养液,37℃,5%的CO2培养箱中培养。定期更换培养液,显微镜动态观察细胞生长情况,及时传代培养。2蛋白免疫印迹Western blot的方法检测结肠癌细胞株DLD-1和正常肠上皮细胞株HIEC中瘦素、BDNF和Trk B蛋白的表达情况。首先用细胞裂解液裂解细胞,获取蛋白提取液,并用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定总蛋白浓度。其次将蛋白提取液SDS-PAGE电泳,目的是根据分子量大小不同从蛋白提取液中分离出目的蛋白。再次,电转仪中将凝胶上目的蛋白转移到PVDF膜上,PVDF膜封闭后与相应一抗抗体充分孵育,抗原和抗体特异性结合反应。二抗经过辣根过氧化物酶偶联标记,识别结合一抗后与发光液接触可发出荧光。最后X光片压片、曝光、洗片和显影。3酶标仪MTT法检测瘦素和BDNF对结直肠癌细胞增殖生长的影响。体外培养结肠癌细胞株DLD-1,取处于生长对数期活性好的肿瘤细胞,形成细胞悬液后细胞计数并均匀接种于96孔板中,细胞浓度为103个/孔。分别用不同浓度的瘦素、BDNF和（或）氟尿嘧啶（fluorouracil, 5-FU）进行干预处理,培养箱中继续培养,一定时间（24h、48h、72h）后,加入相应MTT和DMSO液,酶标仪570nm波长处测定其OD值。按照下列公式计算肿瘤增殖率和抑制率。肿瘤增殖率=（实验组-对照组）/对照组×100%。肿瘤抑制率=（对照组-实验组）/对照组×100%。4统计学分析采用SPSS 13.0统计软件处理所得数据,各组数据以均数±标准差（±s）表示,定量资料的比较采用单因素多水平方差分析（one-way ANOVA）,以P<0.05为差异有统计学意义。结果:1结肠癌细胞株DLD-1高表达瘦素和Trk B,不表达BDNF。正常肠上皮细胞株HIEC不表达瘦素和BDNF,低表达Trk B。2瘦素的肿瘤增殖率随浓度升高而逐渐增高,浓度小于10-9mol/L时与空白组比较增高不明显（p﹥0.05）,等于或大于10-9mol/L时与空白组比较显著增高（p﹤0.05）。同一浓度随时间增加,肿瘤增殖率也逐渐上升。等于或大于10-9mol/L的各浓度,其24h与48h的增殖率相比较差异明显（p﹤0.05）,但48h与72h无显著差异（p﹥0.05）。瘦素减少5-Fu的肿瘤抑制作用,24h、48h和72h均降低5-Fu的肿瘤抑制率,有统计学意义（p﹤0.05）。3 BDNF的肿瘤增殖率随浓度升高而逐渐增高。浓度等于或小于0.05μg/mL时与空白组比较增高不明显（p﹥0.05）,大于0.05μg/mL时与空白组比较显著增高（p﹤0.05）。同一浓度随时间增加,肿瘤增殖率也逐渐上升。24h与48h差异不明显（p﹥0.05）,72h肿瘤增殖率显著高于24h（p﹤0.05）。BDNF也能减少5-Fu的肿瘤抑制作用,24h、48h和72h均明显降低5-Fu的肿瘤抑制率（p﹤0.05）。结论:1瘦素能够促进人结肠癌细胞株DLD-1增殖,浓度越高,时间越长,增殖作用越强。2人结肠癌细胞株DLD-1高表达瘦素,说明在结直肠癌中,肿瘤细胞可以自己合成和分泌瘦素,促进自身增殖。3 BDNF能够促进人结肠癌细胞株DLD-1增殖,浓度越高,时间越长,增殖作用越强。4人结肠癌细胞株DLD-1不表达BDNF,但高表达BDNF的特异性受体Trk B。说明在结直肠癌中,肿瘤细胞不能自身合成BDNF,但能接受外源性BDNF信号,导致细胞增殖。