从海洋生物中筛选提取有应用价值的物质,已成为海洋生物资源开发的一个重要方面。海藻酸具有广泛的应用价值,海藻酸降解产物具有多种生物活性,以酶法降解海藻酸为代表的生物降解法取代传统的化学降解已成为趋势,因此海藻酸裂解酶的研究生产有着深远的理论意义和应用价值。本研究从本实验室分离出的菌株Sphingomonas sp. ZHO成功克隆了4种海藻酸裂解酶基因zh0-Ⅰ、zh0-Ⅱ、zh0-Ⅲ及zhO-Ⅳ,并连接到真核表达载体pPIC9K上,构建了重组质粒pPIC9K-zh0-Ⅰ、pPIC9K-zh0-Ⅱ、pPIC9K-zh0-Ⅲ、 pPIC9K-zh0-Ⅳ。通过电转化的方法将4种表达载体导入毕赤酵母GS115中,通过甲醇诱导表达。结果表明,4种表达载体均能在毕赤酵母中表达,并将目的蛋白分泌至胞外,表达后的海藻酸裂解酶分别命名为ZHO-Ⅰ、ZHO-Ⅱ、 ZHO-Ⅲ和ZHO-Ⅳ,并对产酶条件进行优化,得出最适产酶温度分别为30℃、28℃、28℃、30℃,最适产酶pH分别为6.0、5.5、5.5、5.5,最适诱导甲醇浓度分别为1.5%、1%、1%、1%。在最适产酶条件下酶活分别达到286.36U/mg、349.44U/mg、 48.21U/mg和9U/mg,在已报道的重组海藻酸裂解酶当中,属于较高水平。重组海藻酸裂解酶ZHO-Ⅰ、ZHO-Ⅱ、ZHO-Ⅲ及ZHO-Ⅳ的最适温度分别为37℃、37℃、42℃与37℃,最适pH分别为6.5、6.5、7.0与7.0。底物特异性方面,ZHO-Ⅰ具有polyG,polyM双底物特异性,ZHO-Ⅱ对polyG的底物特异性要高于polyM,ZHO-Ⅲ对polyM的底物特异性要高于polyG。ZHO-Ⅳ是一种外切型海藻酸裂解酶,降解产物为单糖。