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背景:NUSAP1(the nucleolar and spindle-associated protein 1)是一种细胞微管结合蛋白,在纺锤体组装过程中发挥重要功能,是保证细胞周期正常进行的重要调控分子。近年来,越来越多的研究证实NUSAP1在多种肿瘤中表达异常,例如肝癌、前列腺癌、乳腺癌、胶质瘤和口腔肿瘤等,是患者预后不良的重要分子指标,但其在胃癌中的作用及调控机制仍需进一步阐明。本课题分析了NUSAP1在胃癌细胞系及组织中的表达及意义,并探讨了NUSAP1通过稳定YAP蛋白促胃癌侵袭转移的调控机制。方法:采用生物信息学分析、免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)和蛋白质印迹(Western blotting)实验检测胃癌细胞及组织中的NUSAP1的表达水平,并分析其表达与胃癌患者临床病理特征及临床预后的关系;利用细胞学功能实验中,验证干扰和过表达NUSAP1对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响;蛋白质印迹实验和实时定量PCR实验(quantitative real-time PCR)检测NUSAP1蛋白表达的变化对Hippo通路主要成分及下游靶基因的影响;蛋白质半衰期实验(cycloheximide,CHX)、免疫荧光(Immunofluorescence staining,IF)、蛋白质免疫共沉淀实验(CO-Immunoprecipitation,Co-IP)及共转染实验探讨NUSAP1促胃癌侵袭转移的潜在机制;裸鼠成瘤实验观察过表达NUSAP1在体内对胃癌细胞恶性生长的影响。结果:生物信息学分析发现NUSAP1在胃癌组织的高表达,且其高表达与患者的总生存期(overall survival,OS)及无复发生存期(replase-free survival,RFS)密切相关。免疫组化的结果证实NUSAP1在胃癌组织中的表达明显升高(90/161,56%),且其高表达与胃癌患者的临床分期(P=0.006)、浸润深度(P=0.021)、淋巴结转移(P=0.039)显著相关NUSAP1在大多数胃癌细胞系中的表达显著升高,敲除NUSAP1能显著抑制胃癌细胞的增殖、克隆形成、迁移及侵袭等能力;过表达NUSAP1则产生相反的作用效果;机制研究发现NUSAP1能通过结合并稳定YAP蛋白表达从而调控下游靶基因的转录激活促进胃癌细胞侵袭转移;逆转实验的结果发现干扰YAP蛋白能部分抵消过表达NUSAP1促胃癌细胞恶性生物学行为的作用;体内裸鼠成瘤实验进一步佐证了NUSAP1促胃癌细胞恶性进展的重要作用。结论:本研究证实NUSAP1在胃癌组织和细胞中的表达升高,且其高表达与胃癌患者的临床分期差、浸润深度、淋巴结转移及预后差密切相关。干扰NUSAP1能显著抑制胃癌细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力。NUSAP1能通过结合并增加YAP蛋白稳定性实现其促胃癌细胞侵袭转移的重要作用。本项目首次揭示NUSAP1-YAP调控轴在胃癌发生进展中的重要作用,可能为胃癌的诊疗提供新靶点。