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1,3-二氯-2-丙醇(1,3-DCP)是氯丙醇膳食污染物之一,是食品加工过程中产生的一类重要有害物质。有研究表明,1,3-DCP具有多种生物学危害,能够诱导肝细胞脂质异常堆积,并导致小鼠非酒精性脂肪肝(NAFLD)。脂质代谢异常与肥胖、糖尿病、代谢综合症、心血管疾病、肿瘤等疾病密切相关。因此,有必要对膳食1,3-DCP诱导的脂质代谢紊乱进行干预。人们日常饮用的绿茶具有降脂减肥的功效,而绿茶中的主要活性成分就是表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)。EGCG具有改善代谢,抗氧化,调节免疫,抗肿瘤,抗炎等多种生物活性,能有效地缓解脂质代谢异常并减轻肝脏损伤。虽然EGCG具有减少脂质堆积的作用,但是其对1,3-DCP引起的脂质代谢紊乱的干预作用及机制并不清楚。因此,本课题研究了EGCG对1,3-DCP引起的脂质代谢异常的保护效果,并结合体外及体内实验,从蛋白、mRNA等分子水平阐明EGCG干预1,3-DCP诱导肝细胞脂质代谢异常的机制,为1,3-DCP危害控制新方法的建立和EGCG发挥膳食1,3-DCP暴露危害防护作用提供实验依据,具有重要的理论和实践意义。通过体外体内实验首次探索EGCG对1,3-DCP引起的脂质代谢紊乱的干预作用及机制研究:体外实验:利用HepG2细胞,体外建立1,3-DCP诱导的脂质堆积模型,观察不同浓度EGCG的降脂效果,探讨是否对AMP激活蛋白激酶(AMPK),cAMP依赖蛋白激酶(PKA)信号通路有作用,并确定变化的蛋白,确定体内实验蛋白通路;体内实验:利用C57BL/6J小鼠,体内建立1,3-DCP脂质代谢紊乱模型,观察不同浓度EGCG对AMPK,PKA信号通路蛋白及mRNA变化,确定降脂机制。体外细胞实验利用MTT方法筛选1,3-DCP及EGCG的无细胞毒性剂量范围分别为0-0.4 mM,0-20μM。通过检测细胞内总胆固醇(TC),甘油三酯(TG)和油红O染色观察细胞内脂滴含量,确定了1,3-DCP导致细胞脂质堆积的剂量为80μM,EGCG的保护作用剂量为5,10和20μM。此外,EGCG能够显著减少1,3-DCP诱导的细胞内脂质堆积,并呈剂量依赖性。Western Blot结果表明,EGCG能够增加1,3-DCP诱导的HepG2细胞中环磷酸腺苷(cAMP)的水平,PKA和cAMP应答元件结合蛋白(CREB)的磷酸化,以及过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(PGC-1α),去乙酰化酶1型(SIRT1)蛋白的表达。表明EGCG能够通过PKA信号通路来阻止1,3-DCP诱导的肝细胞脂质堆积。此外,EGCG能够增加1,3-DCP诱导的HepG2细胞中肝激酶B1(LKB1),P-AMPK,肉碱棕榈酸转移酶I(CPT1)和磷酸化乙酰辅酶A羧化酶(P-ACC)蛋白表达,减少1,3-DCP诱导的HepG2细胞中甘油三磷酸转乙酞酶(GPAT),脂肪酸转移酶(FAT/CD36),羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR),固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP1c),固醇辅酶A去饱和酶1(SCD1),脂肪酸合酶(FAS)蛋白的表达,表明EGCG能够通过AMPK信号通路来阻止1,3-DCP诱导的肝细胞脂质堆积。体内实验结果,血清中TC,TG,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),谷草转氨酶(GOT/AST),谷丙转氨酶(GPT/ALT)含量的变化,证明了EGCG能够缓解1,3-DCP诱导的小鼠高脂血症和肝细胞损伤。肝脏中TC,TG,脂滴含量及肝脏质量变化,证明了EGCG能够缓解1,3-DCP诱导的小鼠肝细胞脂肪变性。此外,Western Blot及qRT-PCR结果表明,EGCG能够增加1,3-DCP诱导的小鼠肝脏中cAMP的水平和P-PKA,P-CREB,LKB1,P-AMPK,P-ACC,CPT1蛋白或mRNA的表达,减少1,3-DCP诱导的小鼠肝细胞中GPAT,CD36,HMGCR,SREBP1c和固醇调节元件结合蛋白2(SREBP2)蛋白或mRNA的表达。这表明,EGCG能够通过PKA和AMPK信号通路来体内预防1,3-DCP诱导的小鼠脂质代谢紊乱。综上所述,EGCG能够干预1,3-DCP诱导的脂质异常积聚,并且能够通过PKA和AMPK两条信号通路干预脂质代谢紊乱。