药物相互作用目前已成为药物安全性评价的主要内容。CYP3A4是人体CYP450酶系中最大的亚家族之一,广泛参与临床药物的代谢。CYP3A4可被其他药物和化合物诱导或抑制,从而导致严重的不良反应和药物相互作用。黄连素广泛存在于多种中药材、食物和蔬菜中,在体外和体内对人及动物肝CYP450酶系有诱导或者抑制作用。随着黄连素及其制剂在日常生活中广泛的应用,其与CYP3A4相互作用的问题也日益突出。目的本研究采用体内和体外实验的方法,研究黄连素通过对大鼠肝CYP3A4的作用,并阐明黄连素对咪达唑仑在大鼠体内药动学的影响及其机制,为临床合理用药及药物相互作用研究提供依据。方法1黄连素对大鼠肝CYP3A4抑制常数（K_i）的测定采用钙沉淀法制备空白大鼠肝微粒体,在大鼠肝微粒体中加入咪达唑仑、磷酸钾缓冲液、肝微粒体蛋白混悬液,预孵育后加入NADPH启动反应,孵育后加入冰乙腈终止反应,涡旋、离心,取上清液进行分析测定咪达唑仑浓度。以咪达唑仑在大鼠肝微粒体中的转化率作为酶活性指标。在上述孵育体系中,测定不同浓度黄连素对咪达唑仑转化率的影响,计算黄连素对CYP3A4活性的抑制常数。2不同剂量及不同作用时间黄连素对大鼠肝CYP3A4的影响分别以低剂量(75mg·kg^-1·d^-1)、中剂量组(150mg·kg^-1·d^-1)和高剂量组(300mg·kg^-1·d^-1)的黄连素,给予大鼠连续灌胃8d,制备肝微粒体,以咪达唑仑在大鼠肝微粒体中的转化率作为酶活性指标,考察不同剂量黄连素对大鼠肝CYP3A4影响。以150mg·kg^-1·d^-1的黄连素,分别给予大鼠连续灌胃4d、8d和12d,制备肝微粒体,以咪达唑仑在大鼠肝微粒体中的转化率作为酶活性指标,考察不同作用时间黄连素对大鼠肝CYP3A4影响。3黄连素对大鼠体内肝CYP3A4的影响12只健康雄性SD大鼠,随机分为对照组（n=6）和试验组（n=6）,对照组连续灌胃生理盐水8d,试验组连续灌胃150mg·kg^-1·d^-1黄连素8d后,两组均于末次灌胃后即刻,静脉推注10mg·kg^-1咪达唑仑注射液,并于给药后不同时间点经眼眶内眦采血0.5ml,离心后应用高效液相色谱法（HPLC）测定大鼠血浆中咪达唑仑的浓度。数据采用DAS 2.0软件进行处理,计算咪达唑仑药代动力学参数,其中峰浓度(C_max)为实测值,考察黄连素对咪达唑仑药动学的影响。结果1黄连素对大鼠肝CYP3A4抑制常数（K_i）的测定大鼠肝CYP3A4代谢咪达唑仑的K_m为28.67μM,V_max为3.06nmol·min^-1·mg protein^-1,内在清除率CL_int为0.11 ml·min^-1·mg^-1。黄连素竞争性抑制大鼠肝微粒体CYP3A4对咪达唑仑的代谢,其抑制常数K_i为116.4μM。2不同剂量及不同作用时间黄连素对大鼠肝CYP3A4的影响黄连素低剂量组与对照组无显著性差异,黄连素中剂量组和高剂量组可显著抑制大鼠肝CYP3A4的活性,降低咪达唑仑在体外的代谢,K_m分别28.66±7.89、28.88±8.11、30.99±7.78和36.37±8.22μM;V_max分别为3.96±0.30、3.05±0.30、2.89±0.26和2.54±0.82nmol·min^-1·mg protein^-1;CL_int分别为138.17±5.29、105.61±3.65、93.26±1.47和69.84±1.08ml·min^-1·mg^-1。黄连素连续灌胃4d组与对照组无显著性差异,连续灌胃8d组和12d组,黄连素可显著抑制大鼠肝CYP3A4的活性,降低咪达唑仑在体外的代谢,K_m分别28.77±7.88、29.56±8.04、30.93±7.75和36.24±8.23μM;V_max分别为3.06±0.29、3.08±0.31、2.89±0.86、和2.56±0.24nmol·min^-1·mg protein^-1;CL_int分别为106.36±10.54、104.19±6.71、93.44±3.19和70.64±2.48 ml·min^-1·mg^-1。3黄连素对大鼠体内肝CYP3A4的影响单用咪达唑仑组和咪达唑仑合用黄连素组,主要的药动学参数C_max分别为6.53±0.58和8.82±1.05μg·ml^-1,T_1/2分别30.00±8.75和27.42±5.08min,V_d分别为2.85±1.35和1.92±0.43L·kg^-1,CL分别为4.03±1.24和2.98±0.76 L·h^-1·kg^-1,AUC_0-∞分别为2.81±1.11和3.59±0.95mg·h·L^-1。结论1.黄连素可竞争性抑制大鼠肝微粒体CYP3A4对咪达唑仑的代谢。2.黄连素对大鼠肝CYP3A4的抑制作用随剂量的增加而增强,随作用时间延长而增强。3.黄连素可显著改变咪达唑仑在大鼠体内的药动学,使C_max和AUC显著性增大,同时CL显著性降低。其机制可能与黄连素竞争性抑制大鼠肝CYP3A4有关。