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研究背景及:胶质母细胞瘤(GBM) 来源于人类中枢神经系统上皮组织,且是最常见的原发性肿瘤[1]。手术加上术后联合放疗化疗是现行GBM治疗的标准方案[2; 3]。据统计胶质母细胞瘤患者在现今治疗技术下平均存活时间是15个月[4]。在Wnt信号通路中β-catenin关键分子之一,它与包括GBM在内的多种肿瘤都有密切关系[5;6;7]。据之前研究,在胶质瘤侵袭和迁移过程中β-catenin及其下游信号(如COX-2,MMP-2/9 )都发挥着关键的作用,从而导致胶质瘤患者常常术后复发,放化疗抵抗,预后差,生存期短[8;9;10]。Fucoxanthin (岩藻黄素)是一种海洋植物的提取物,属于类胡萝卜素族,其分子结构中特异的共轭羰基,乙酰基官能团使其具有抗氧化活性,现有研究发现Fucoxanthin对直肠癌、结肠癌的发生发展产生抑制作用[11;12;13;]。在先前的研究中,我们发现岩藻黄素可以通过多种机制来抑制各种癌细胞,促癌细胞凋亡、癌细胞的细胞周期停滞[14;15;16],然而,岩藻黄素是否可以抑制胶质瘤侵袭迁移仍是未知。在目前的研究中,我们发现了岩藻黄素在体外试验中具有抗肿瘤活性。此外,我们侧重于岩藻黄素对癌细胞抗侵袭和抗迁移的影响,并研究了其分子机制。研究目的1.研究岩藻黄素对胶质瘤干细胞增殖的抑制;2.研究岩藻黄素对胶质瘤干细胞迁徙和侵袭的抑制;3.研究岩藻黄素在胶质瘤干细胞迁徒和侵过程涉及的分子机制;试验方法1.MTT法探究岩藻黄素对胶质瘤干细胞增殖的抑制作用;2.划痕实验测定岩藻黄素作用后细胞迁移能力的变化3. Transwell板上检测岩藻黄素作用后U87及U251细胞侵袭迁移能力4. Western blotting检测岩藻黄素作用后U87及U251侵袭迁移相关蛋白变化5.用质粒转染的方法制造β -catenin过表达的U87及U251细胞6.检测岩藻黄素作用后U87及U251细胞系中金属基质蛋白酶含量7.过表达β -catenin后岩藻黄素对于细胞侵袭迁移相关蛋白作用的进一步论证。8.图像及数据处理所得图像使用Image J处理,处理后所有数据均以平均值士标准误(X 土 SE)表示,应用SPSS 18.0进行处理,成组数据采用t检验,以P<0.05具有统计学意义。研究结果1两个细胞系分别培养于浓度范围从25μ到100μm的岩藻黄素中,后分别于12、24小时后观察细胞活性下降程度。与对照细胞相比,U87细胞存活率分别为是86.82%、71.12%、37.36%,。同时, U251细胞的细胞存活值分别为71.68%、55.76%、38.1%。结果表明,岩藻黄素对U87和U25细胞的增殖有较强的抑制作用。2. Fucoxanthin对胶质瘤干细胞U87及U251的侵袭迁移能力有明显的抑制作用3. Fucoxanthin对胶质瘤干细胞U87及U251的侵袭迁移能力是经由Wnt/β —catenint通路作用达到效果的。3.1岩藻黄素抑制β -连环蛋白/ cox2/MMP2/9通路3.2 β-连环蛋白的过度表达会减弱岩藻黄素作用。β-连环蛋白的过度表达逆转岩藻黄素的抗转移活性结论:我们认为在体外,岩藻黄素可以有抑制胶质瘤干细胞侵袭能力,从而抑制GBM转移。此外,我们证明了岩藻黄素可以通过β-连环蛋白,部分诱导抑制调节MMP2/9和COX2从而抑制细胞侵袭迁移。我们由此得出结论,岩藻黄素是一种有望治愈胶质瘤的化学制剂。