人α1微球蛋白质的结构和功能研究

来源 :重庆医科大学 重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hy1208
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背景脂质运载蛋白是一种拥有30-50个成员的蛋白质超家族,有着保守的三维结构,但却发挥着一系列不同的生物学功能。作为脂质运载蛋白质超家族的成员之一, α1-微球蛋白质(α1-microglobulin, α1M)在进化上高度保守且分布广泛提示该蛋白质具有重要的生理功能,目前有研究发现其能结合和降解血红素,具有还原酶活性及抗氧化性及免疫调节作用。但其功能活性位点以及具体的功能机制仍然不清楚。目的本研究将解析人α1M蛋白质的三维结构并基于其结构研究其生化和生理功能,从而了解其具体的功能机制并为基于α1M蛋白质三维结构的抗炎、抗氧化及免疫调节药物的研究开发打下基础。方法通过克隆、表达纯化等技术获得足够纯度的人α1M蛋白质,然后培养蛋白质晶体,通过X衍射技术获得晶体衍射数据随之解析人α1M蛋白质三维结构;基于其三维结构,利用定点突变,光谱分析等技术研究α1M蛋白质的功能机制。结果通过分子克隆、表达纯化等相关技术成功获得了纯度达95%的人α1M蛋白质;分子筛(Superdex75)纯化结果显示α1M在溶液中以单体和二聚体两种聚集状态存在;通过蛋白质晶体的筛选及优化成功获得了适于X射线衍射的高质量单晶;收集到了分辨率为2.0常规衍射数据及分辨率为3.0单波长反常散射衍射(single-wavelengthanomalous dispersion,SAD)数据,成功的解析了α1M蛋白质的三维结构;利用ABTS法进行检测,结果表明本研究获得重组的α1M具有抗氧化能力,具备还原酶活性。
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