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罗丹明类荧光染料由于其优异的光物理性能而被广泛应用于生物荧光分析中。生物细胞内pH值影响着各项生命活动,对细胞内pH值的检测非常重要。目前报道的罗丹明pH探针多数是内酰亚胺形式的,存在水溶性差的问题,且文献中报道的罗丹明衍生物中很少有能对亚细胞结构实现定位的同时进行检测的化合物。另外罗丹明4’和5’位带有活性基团羧基的衍生物存在异构体,使其在生物标记方面的应用受到限制。本文分别针对定位细胞溶酶体的pH探针及4’和5’位羧基罗丹明异构体拆分这两个问题进行了研究。1.设计、合成以罗丹明为母体的pH荧光探针化合物A2-A6,测定了五个化合物不同pH值下的荧光光谱、吸收光谱和荧光量子产率,化合物A2-A6对pH均有敏感响应,最大荧光量子产率分别为0.31(A2)、0.88(A3)、0.87(A4)、0.67(A5)和0.63(A6),通过曲线拟合的方法计算出五个化合物的pKa值分别为8.80(A2)、7.94(A3)、5.40(A4)、5.91(A5)和5.76(A6)。共聚焦荧光显微成像实验研究表明,五个化合物均能穿透细胞膜进入细胞内部,其中化合物A5和A6对细胞培养5min即可进入细胞内部,准确定位于细胞溶酶体中；通过药物刺激使溶酶体内pH值升高,两个化合物荧光强度均明显降低。另外,测定了不同pH值下水溶液中化合物A5和A6的荧光寿命,实验结果表明化合物A5和A6pH在4.5～7.0之间荧光寿命对pH值有敏感响应,两个化合物荧光寿命对pH值得响应不受溶液中血清蛋白的影响。2.通过重结晶方法拆分3,6-溴-4’(5’)-羧基氧杂蒽,再利用醋酸钯催化3,6-溴-4’-羧基氧杂蒽和3,6-溴-5’-羧基氧杂蒽与二甲胺偶联分别得到3,6-二甲胺基-4’-羧基罗丹明和3,6-二甲胺基-5’羧基罗丹明两个单一化合物,实现了3,6-二甲胺基-4’(5’)-羧基罗丹明异构体的拆分。