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目的:研究大黄素对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响及其对肿瘤抑癌基因RASSF10表达的影响,探讨大黄素影响RASSF10表达的作用机制。方法:将呈对数期生长的人肝癌细胞HepG2随机分成五组,分别予以0、20、40、80umol/L大黄素及5umol/L5-Aza-cdR处理各组细胞,分别为阴性对照组、低浓度剂量组、中浓度剂量组、高浓度剂量组及阳性对照组。分别在药物作用0 h、24h、48h、72h的时间点采用MTT法检测各组细胞OD值;在药物作用细胞48小时后收集各组Hep G2细胞,利用流式细胞仪(FCM)检测各组细胞的凋亡率;采用甲基化特异性PCR(MSP)检测各组细胞RASSF10基因启动子甲基化及非甲基化条带的扩增情况;Western blot检测各组细胞中RASSF10、DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的表达。结果:1.MTT结果显示,大黄素或5-Aza-cdR作用人肝癌HepG2细胞24h、48h、72h后细胞的OD值均较阴性对照组明显下降(均P<0.05),在同一时间点各实验组细胞的OD值均较阴性对照组低(均P<0.05),随药物浓度及时间的增加而降低,组间对比差异有统计学意义(均P<0.05)。2.流式细胞术(FCM)结果显示,各组细胞凋亡率分别为:(6.77±0.21)%、(10.08±0.56)%、(14.87±0.78)%、(27.9±0.29)%、(21.05±0.35)%,与阴性对照组比较,大黄素组HepG2细胞的凋亡率明显增加(均P<0.05),随着药物浓度的增强其凋亡率也随之增加,组间对比差异有统计学意义(均P<0.05)。3.MSP结果显示,阴性对照组中仅甲基化PCR扩增为阳性,非甲基化PCR扩增为阴性;低剂量浓度组和中剂量浓度组中甲基化及非甲基化PCR均为阳性,而高剂量浓度组及阳性对照组中甲基化PCR扩增为阴性,非甲基化PCR扩增为阳性。4.Western blot结果显示,与阴性对照组比较,大黄素组HepG2细胞中RASSF10基因蛋白水平增加,而DNMT1、DNMT3a基因蛋白水平降低(均P<0.05),且呈浓度依赖性,DNMT3b蛋白水平则保持不变(P>0.05)。结论:1.大黄素促进肝癌细胞凋亡,抑制肝癌细胞增殖。2.大黄素通过抑制DNMT1和DNMT3a的表达,维持肝癌细胞HepG2中RASSF10基因的去甲基化。