ASICs在膀胱粘膜上皮细胞及膀胱平滑肌细胞上表达的意义

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目的:了解ASICla和ASIC3在膀胱尿路上皮细胞株(SV-HUC-1)及膀胱平滑肌胞株(HBdSMC)表达的情况,并观察阿米洛利及细胞培养液pH值改变对两种细胞株ASICla和ASIC3表达的影响及对细胞电流变化的影响。方法:1、对人膀胱尿路上皮细胞株(SV-HUC-1)和膀胱平滑肌细胞株(HBdSMC)进行传代培养,并利用荧光免疫检测其中ASICla和ASIC3蛋白的表达;2、培养液中加入酸敏感离子通道抑制剂阿米洛利后,检测SV-HUC-1细胞株、HBdSMC细胞株ASICla和ASIC3蛋白表达3、改变胞外H+浓度并加入ASIC抑制剂阿米洛利,使用膜片钳技术检测人膀胱尿路上皮细胞电流变化情况。结果:免疫荧光染色显示:(1)人膀胱尿路上皮细胞株及膀胱平滑肌细胞株上含有ASICla和ASIC3蛋白表达;且ASICla和ASIC3蛋白主要表达于膀胱尿路上皮细胞株上,膀胱平滑肌细胞株中ASICla和ASIC3蛋白的表达远不及膀胱尿路上皮细胞株(P<0.01)。人膀胱尿路上皮细胞株中,ASIC3蛋白表达要明显高于ASICla(P>0.05);人膀胱平滑肌细胞株中,ASICla和ASIC3蛋白表达无明显差异(P>0.05)。(2)加入ASIC抑制剂阿米洛利后,人膀胱尿路上皮细胞株上ASICla的表达降低(P<0.05,),ASIC3表达明显降低(P<0.01);膀胱平滑肌细胞株中ASICla和ASIC3蛋白表达无明显变化(P>0.05)。(3)膜片钳检测提示:人膀胱尿路上皮细胞株上ASICs随胞外H+浓度上升而产生相应的电流,H+浓度越大,电流强度越高(R=0.832>0.06)。加入ASICs的特异性抑制剂阿米洛利后,相同pH值下人膀胱尿路上皮细胞株上ASICs所引起的电流强度明显减弱(P<0.05)。结论:1.人膀胱尿路上皮细胞株及膀胱平滑肌细胞株上均含有ASICs, ASICla与ASIC3在人膀胱平滑肌细胞株内的蛋白表达较少且相差无几,而在膀胱尿路上皮细胞株中ASIC3蛋白表达明显比ASICla高。2.酸敏感离子通道抑制剂阿米洛利可以抑制膀胱尿路上皮细胞株中ASICla和ASIC3的蛋白表达;对膀胱平滑肌细胞株中ASICs的影响不明显;3.人膀胱膀胱尿路上皮细胞株上表达ASICs受H+的影响较大,其过度的蛋白表达及所引起的电流变化均可被阿米洛利抑制。
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