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背景和目的:肝纤维化是各种慢性肝病进展为肝硬化、甚至肝癌的重要阶段。随着对肠源性内毒素血症与肝纤维化发生之间关系的深入研究,内毒素脂多糖(lipopolyssacharide,LPS)在慢性肝病进展过程中的作用倍受关注。然而,内毒素LPS在肝脏疾病的确切致病机制仍未完全阐明。最近,我们的研究发现长期酒精喂养大鼠门静脉LPS升高,其在酒精性肝纤维化发生学中发挥重要作用。本研究旨在通过对SD大鼠尾静脉反复注射内毒素LPS,以期进一步阐明内毒素LPS单因素在大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)介导肝纤维化发生中的作用及机制。方法:将24只体重120g±20g SD雄性大鼠随机分为正常对照组(n=12)与内毒素组(n=12)。两组大鼠均接受Lieber-Decarli配方的液体饲料喂养至10周末,其中LPS组于喂养8周末开始每周经尾静脉注射LPS一次(3 mg/kg),共3次,对照组注射生理盐水1ml。采用光度法检测大鼠门静脉血浆LPS浓度。ELISA法测定大鼠肝脏I型胶原A1和羟脯氨酸的含量。免疫组织化学染色检测大鼠肝组织F4/80和FSP-1分别识别激活的库普弗细胞(Kupffer cells,KC)和HSC;免疫荧光双染技术检测FSP-1阳性HSC表达TLR4和F4/80阳性KC表达TLR4或TGF-β1。采用RT-q PCR检测大鼠肝组织IL-1、IL-6、TNF-α和TGF-β1 m RNA。采用HE染色和苯胺蓝染色法评价肝脏炎症反应和纤维化程度。采用Collagenase-Pronase消化法分离大鼠HSC,建立HSC过渡模型,评价LPS在TGF-β1作用下大鼠HSC介导肝脏纤维化发生中的作用及机制。采用Western Blot检测HSC Collagen I、Bambi和p Smad2表达;RT-q PCR法检测HSC Collagen I和Bambi m RNA表达。结果:与正常对照组相比反复LPS注射组大鼠肝组织存在明显的水肿及炎细胞浸润,肝组织致炎症因子IL-1、IL-6、TNF-αm RNA和纤维源性因子TGF-β1 m RNA转录水平明显升高,肝组织胶原沉积面积明显增大,反映肝组织胶原合成增加的I型胶原A1和脯氨酸含量也明显增加。免疫荧光双染结果显示:FSP-1阳性HSC和F4/80阳性KC均可表达TLR4受体,反复内毒素LPS注射可激活肝组织HSC和KC表达TLR4受体增加,也可使KC表达TGF-β1增加。在原代HSC研究发现:LPS可抑制TGF-β1伪受体Bambi m RNA和蛋白质表达,使得TGF-β1刺激HSC合成Colagen Im RNA和蛋白质的功能增强,然而,LPS对HSC的TGF-β1/Smad2通路没有作用。结论:内毒素LPS可激活肝脏HSC和KC内TLR4信号通路,合成致炎性因子和纤维源性因子TGF-β1。LPS还通过降低HSC Bambi表达水平,协同TGF-β1合诱导HSC合成I型胶原,促进肝纤维化。