布鲁氏菌病是一种由布鲁氏菌属菌株引起的人畜共患病,在全球范围内传播和分布。B.melitensis、B.abortus、B.suis对人和动物具有较强的致病性,动物临床表现为流产、死胎、胎儿虚弱、子宫内膜炎和乳腺炎,一旦出现感染,布鲁氏菌会在畜群中迅速蔓延,给畜牧业造成巨大的经济损失。疫苗免疫接种是防控动物和人布鲁氏菌病的最佳方法,而当前普遍使用的动物布鲁氏菌疫苗（如S19、Rev.1、S2、M5和RB51等）均为减毒活疫苗存在明显不足,主要表现为毒力残留、对人和怀孕动物存在感染风险、无法区分疫苗免疫和野毒感染等,开发更安全、有效的新型布鲁氏菌病疫苗势在必行。菌影是具有完整细菌结构的细菌空壳,通过温度控制噬菌体E基因表达制备的菌影保留了细菌表面蛋白的天然结构,能够诱导机体产生良好的免疫应答反应,但绝对灭活是当前菌影制备技术的主要难点,引入二次杀死是确保绝对灭活的必要手段。本研究将噬菌体裂解基因E克隆至温控质粒中,电转A19后成功构建了布鲁氏菌A19BG菌影菌株,该菌株具有典型的菌影形态,连续传代20次遗传稳定。使用裂解灭活和0.1%的H2O2联合用于布鲁氏菌菌影的灭活,灭活效率可达到100%。将完全灭活的布鲁氏菌菌影与ISA 206 VG佐剂混合,在豚鼠模型中进行评价,结果显示,A19BG具有典型的BG形态和良好的遗传稳定性,豚鼠接种后不会引起不良反应。A19BG疫苗接种豚鼠后体内抗体、干扰素IFN-γ、白细胞介素IL-4和CD4+T细胞的水平与接种A19疫苗后相似。用A19BG免疫豚鼠和牛后能有效抵御布鲁氏菌M28的攻击,豚鼠保护率为83.3%,牛保护率为60%,保护效力与A19相似。利用基于质谱的无标记相对定量蛋白组学方法来研究A19BG与其亲本A19整体蛋白组学变化。蛋白组学确定了2014种蛋白,1116种与A19蛋白相比存在差异表达,其中OMP（Bcsp31、Omp25、Omp10、Omp19、Omp28和Omp2a）、HSP（Dna K、Gro S和Gro L）和Sod C等常见免疫蛋白在A19BG中均可以检测到,且含量不低于A19,这些蛋白可能是A19BG产生免疫保护性作用的基础。基于蛋白质微阵列的抗体谱技术发现30多个特异性免疫原性蛋白,其中BMEII0032和BMEI0892蛋白对免疫A19免疫血清和A19BG血清之间的反应有显著差异（P＜0.5）,可以作为A19BG候选疫苗的鉴别诊断抗原。综上所述,本研究构建了A19BG菌影菌株,开发了A19BG菌株完全灭活方法,证实A19BG菌影疫苗具有可靠的安全性和有效性,发现A19BG疫苗产生保护效力的机制,筛选到2种鉴别诊断靶标。研究结果为布鲁氏菌病防控提供新的技术手段。