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柑橘是目前世界生产量和消费量最大的一种水果,年产量1亿吨以上,年贸易额超过230亿美元。目前我国柑橘栽培面积3000万亩以上,年产量2400多万吨,均居世界第一位。柑橘种苗质量是柑橘产业可持续发展的关键因素之一,但目前我国柑橘生产中种苗质量问题比较突出,种性不纯种苗和假种苗坑农事件时有出现,严重损害种植者的经济利益。针对目前我国柑橘种苗生产中出现的问题,建立快速准确的种苗纯度和真实性鉴定技术,对减少假种苗和种性不纯苗木、规范种苗市场、切实维护种植者利益等具有重要的意义。在本实验室已建立的柑橘DNA指纹图谱库基础上,本研究通过完善DNA指纹图谱库,建立合理的抽样方案和DNA快速提取技术,进一步完善了柑橘种苗纯度与真实性检测DNA指纹图谱技术。主要结果如下：1.柑橘品种DNA指纹图谱库的完善选取本实验室前期建立的DNA指纹图库中没有包括的30个柑橘品种,以CTAB法提取基因组DNA,利用从90对SSR引物中筛选出的20对特征引物进行SSR分析,利用指纹图谱自动识别软件Gel 2.0将30个品种的DNA特征指纹转换成标准指纹模式图谱,从而完善了DNA标准指纹图谱库。2.DNA快速提取法研究以CTAB法为基础,通过比较不同的裂解时间、抽提时间和次数、离心力等条件下提取的DNA质量和PCR扩增结果,建立了1 hr之内提取出纯度高、完整性较好、可满足SSR标记分析的DNA快速提取技术。3.抽样方案抽样方案影响到种苗纯度和真实性检测的成本和检测结果的准确性。根据种苗生产行业规则的纯度要求和实际抽样调查,确定柑橘种苗检验的质量接受限AQL值为1,检索国家标准GB/T2828.1-2003《按接收质量限(AQL)检索的逐批检验抽样计划》,制定了批量大小从10株至50万株分为13个等级的抽样方案,克服了传统方法以全数检查或按百分比抽样的不合理性,进一步完善了基于DNA指纹图谱的柑橘种苗纯度及真实性检测技术体系。4.柑橘种苗纯度及真实性DNA指纹图谱检测技术验证按照上述抽样方案,从10000株天草、南香种苗中分别抽取200株,快速提取DNA进行SSR分析,结果表明所有的柑橘种苗都获得了清晰稳定的谱带,将这些品种的SSR特征指纹在标准指纹图谱库中进行检索,发现所有样品的指纹与标准指纹一致,证明建立的DNA指纹图谱技术可有效用于柑橘种苗纯度和真实性鉴定。