辅酶复合物原料药的提取工艺研究

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辅酶是人体物质代谢中重要而不可缺少的辅助因子。辅酶复合物因富含多种活性成分(辅酶A、辅酶I、GSH、ATP等)及其相互间的协同增效功能,而对机体的新陈代谢、蛋白质合成、组织及生理功能的动态平衡等具有重要的促进作用,是临床上治疗急慢性肝炎、原发性血小板减少性紫癜、冠状动脉硬化、肾功能不全等疾病的重要辅助药物。有关辅酶复合物的提取工艺国内外少有报道。本文从工业化生产辅酶复合物的角度出发,以成本低廉的酵母为原料,辅酶单体的生产工艺为基础,进行了提取工艺的筛选和研究。 论文首先对酵母细胞的破壁方法进行了比较研究,得出温差破壁法为生产辅酶复合物的最佳破壁工艺。经正交试验显示,其最优化的工艺条件是料液比3,保温温度90℃,保温时间5 min。破壁后辅酶复合物的得率达到了39%。 在对破壁液分离步骤的研究中,分析比较了辅酶单体成分常用的活性炭吸附层析及超滤分离技术,确定了采用超滤技术代替活性炭层析,其所得结果不但避免了后者的碱性洗脱液对辅酶活性的破坏,而且提高了整个工艺的分离效率,使工艺流程更为简洁、流畅。经过对D85#、D315#、717#、732#等四种离子交换树脂分离纯化能力的比较实验,结果显示717#树脂对辅酶复合物的吸附能力、分离效果最好,并通过对该树脂的分级洗脱试验和最佳洗脱条件的摸索,确定了能使辅酶复合物一步洗脱分离的洗脱体系(洗脱液浓度为0.2 mol/L NaCl-0.02 mol/LHCl),从而有效地保证了各活性成分的相对稳定性,更好地发挥复方制剂的协同增效作用。 辅酶复合物的提取工艺流程(工艺流程-3)为酵母原料→温差破壁→超滤提取→树脂层析→浓缩→丙酮沉淀→原料药。本工艺具有稳定性好、产品得率高、操作简单,适于工厂生产所要求的无缝式、连续化、自动化操作等特点。利用本工艺制得的原料药中辅酶A、辅酶I纯度分别为1.7861 u/mg、1.765μg/mg、纯度比值为1.01,原料药总得率为3.35%、理论制剂得率为112支/200 g干酵母投料,完全达到或优于规定的技术指标,其余指标也都符合国家药品标准。
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