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白腐真菌产生的木质素过氧化物酶(LiP)在污染治理领域中具有广阔的应用前景,但其发酵生产受到白腐真菌自身生长调控条件的限制,LiP基因的异源表达是解决这个瓶颈问题的有效途径。至今异源表达LiP的相关研究工作尚开展的不多,需要探索。因此,本论文的目的是获得白腐真菌木质素过氧化物酶(LiPH2)基因,分别将其转化于巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)和大肠杆菌(Escherichia coli),获得LiPH2基因的异源表达特性。本论文通过一步反转录PCR的方法获得了100%正确的LiPH2原始基因;通过化学合成方法获得了碱基序列优化后的合成基因。在LiPH2在酵母中的异源表达特性研究中,分别将去除和含有自身信号肽的原始基因及合成基因与各种表达载体连接,并转化进入相应的Pichia pastoris宿主菌中,共构建了14个不同的毕赤酵母表达系统,其中2个表达系统的酵母转化子能够分泌LiPH2重组蛋白。通过对影响目的基因表达的各种因素的分析,得到以下结论:无论是α因子信号肽还是LiPH2自身信号肽都能引导LiPH2的分泌表达;毕赤酵母的不同表达载体,对外源蛋白的表达存在较大差别;PEP4基因的缺失,对LiPH2蛋白的表达有不利影响;C-端氨基酸的增加可促进合成基因的表达。重组蛋白分子量大小均有所增加,说明很可能有过度糖基化的影响。过度糖基化、N-端或C-端氨基酸的增加可能是造成表达蛋白没有活性的主要原因。在LiPH2在大肠杆菌中的异源表达特性研究中,分别将去除和含有自身信号肽的原始基因与各种表达载体连接,并转化进入Escherichia coli受体菌中,共构建了4个不同的大肠杆菌表达系统,3个系统的菌株均能可溶性表达LiPH2重组蛋白,其表达量高于重组酵母的表达量。融合标签的存在,能够明显促进LiPH2在大肠杆菌中的可溶性表达。LiPH2自身信号肽的存在,使少量LiPH2重组蛋白分泌到胞外。N-端氨基酸的增加可能是造成表达的重组蛋白没有活性的主要原因。以上成果为进一步开展LiPH2异源表达的研究奠定了基础。