【摘 要】
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乙型病毒性肝炎是全球公共卫生问题,全世界约有3.5亿人因乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus; HBV)导致慢性感染,慢性感染可能会发展为肝硬化甚至肝癌( hepatocarcinoma; HCC)。
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乙型病毒性肝炎是全球公共卫生问题,全世界约有3.5亿人因乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus; HBV)导致慢性感染,慢性感染可能会发展为肝硬化甚至肝癌( hepatocarcinoma; HCC)。目前对慢性乙肝患者治疗常用的药物为I型干扰素(Interferon,IFNs)与核苷类似物(nucleotide analogs,NAs),它们在临床上得到了广泛应用并且在一定程度上减缓了疾病的恶化。但是由于HBV病毒变异速度快,药物疗效有限,还无法长期有效地遏制HBV对人肝组织细胞的感染及其在胞内DNA的复制。为了寻找新型治疗方法及抗病毒药物,需要深入了解HBV的感染机制,这就有待于筛选理想的HBV感染模型。近二十年来HBV体内感染模型研究进展缓慢,而HBV体外感染模型的研究取得了长足的进展,其中稳定HBV表达细胞系由于其表达水平较稳定且几乎所有细胞都能产生HBV,逐渐成为国内外学者研究的热点。本研究通过构建包含HBV1.1倍体及巨噬细胞病毒(cytomegalovirus;CMV)启动子的重组质粒pneo-CH9/3091,使其表达新霉素(neomycin)抗性并将其稳定转染至人肝癌细胞HepG2,经G418筛选,得到单克隆细胞株。通过多种分子生物学手段,如酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清表面抗原(HBsAg)及e抗原(HBeAg)的分泌,Western blot检测细胞内HBV核心蛋白(HBcAg)的表达,以及Southern blot检测细胞内核心颗粒HBV DNA的复制情况等,建立了一株HBV稳定整合细胞株HepG2-H7。最后将此细胞株与HepG2.2.15细胞在HBV DNA的复制与蛋白表达水平等方面进行了比较。本研究结果提示HepG2-H7细胞株有望应用于抗病毒药物的筛选和HBV感染机制的研究。
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