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白斑综合征病毒(WSSV)是造成全球范围内虾类养殖中经济损失的一个主要原因。为了解我国WSSV的流行变异情况,本研究对5个高变异区ORF14/15、ORF23/24、ORF75、ORF94、ORF125以及wsv089、wsv150进行了变异分析,并构建了wsv089和wsv150的酵母双杂交诱饵载体。具体内容如下:选取2017年中国部分地区的42个WSSV阳性样本,对ORF14/15、ORF23/24、ORF75、ORF94和ORF125共5个可变区进行PCR特异性扩增,分析其序列的缺失情况和重复单元(Ru)中单核苷酸多态性的变化。研究结果显示,在ORF14/15的扩增中各分离株共出现4种缺失片段,各片段之间差异较小;ORF23/24只出现11945bp的缺失片段;ORF75扩增中,总RUs数目为3、4、9,其中45bp的RUs在12、27、80位点发生多核苷酸多态性;ORF94的RUs数目为6,且均在48bp的位置出现单核苷酸多态性;ORF125的RUs数目为4、6、7不等,其各重复单元分别在20、27、50、53、61位发生碱基突变。研究结果表明,在2017年样本中来自我国不同地区的WSSV分离株之间均存在不同程度的变异情况,其中部分高缺失区表现出缺失情况的稳定性,某些可变区的重复单元数目及SNP则由于地域差异出现了不同的数目变化,SNP的位点也各不相同。目前对于WSSV不同分离株wsv089和wsv150基因变异研究相对较少,本研究针对2017年中国部分地区的42个WSSV阳性样本选取wsv089和wsv150两个位点,设计出该序列的特异性引物并通过PCR反应获取目的片段,选取阳性样本进行测序,并比对其变异情况。研究结果显示,在wsv089的PCR扩增中,共出现10个阳性样本,分别出现在福建霞美镇、广东湛江、山东东营和上海4个地区,其检出率为23.8%。与标准序列比对,福建霞美镇、山东东营和上海地区样本的核苷酸均在第72位插入ATCT,导致氨基酸出现替换和插入的现象,在第26位脯氨酸(P)替换为亮氨酸(L),在27位插入了苏氨酸(T)、脯氨酸(P)和丝氨酸(S);在广东湛江地区样本中只出现一种核苷酸的变异,均在第97位插入CCCC。在wsv150的PCR扩增中,共检出8个阳性样本,分别出现在福建霞美镇、广东湛江、山东东营和上海4个地区,其检出率为19%。其核苷酸序列均在第587位插入碱基T,导致在第196-199位出现4个氨基酸的替换,在200位氨基酸后缺失了106个氨基酸大片段,即提前终止翻译。酵母双杂交系统因其高敏性等特点近几年来在现代分子生物学发展中得到了广泛应用,是在真核细胞内研究蛋白质相互作用的一种手段。本章节对已构建好的cDNA文库进行了质量的鉴定,为筛选wsv089和wsv150与宿主互作的分子,分别构建了诱饵载体PGBKT7-089和PGBKT7-150,并对其自激性及毒性进行了检测。研究结果显示cDNA文库容量约为7.47×10~7CFU/ml,插入片段大小约为500-2000bp,符合Clontech公司的Yeastmaker?酵母转化系统对文库的要求,可用于下一步的筛选实验。经过菌落PCR以及序列分析表明诱饵载体PGBKT7-089和PGBKT7-150构建成功,并且无法激活报告基因的表达,对酵母细胞无毒性,符合实验要求。为可下一步进行筛选互作因子的工作提供了科学依据和前提条件。