论文部分内容阅读
目的：基于“脾主肌肉”探讨葛根及其配伍对EAMG大鼠骨骼肌肌力及神经传导功能的影响，探讨EAMG大鼠模型制造的有效方法，分析葛根及其配伍对治疗MG的作用机制。 方法：选择健康的SPF Lewis雌性大鼠150只，分空白组（10只），模型组（20只），强的松组（20只），葛根组（20只），葛参组（20只），葛芪组（20只），葛妙组（20）只，葛芪参妙组（20只）。首次免疫称鼠源性AchR-a亚基97-116肽段100 ug溶于高压灭菌的100uL3％氨水中，再混入CFA和PBS，将R97-116、CFA、PBS三者按1:1.5:1.5的比例充分混匀后，取乳剂200uL（(含R97-116:100ug）给造模各组大鼠多点皮下注射接种免疫。30 d后进行二次免疫，称取肽段50ug溶于高压灭菌的50uL3％氨水中，再混入IFA和PBS，将R97-116、IFA、PBS三者按1:3:3的比例充分混匀,取乳剂200 uL(含R97-116:50ug)强化接种，空白组大鼠注射等量PBS，正常饲养，观察大鼠的体重和肌力变化状况。确立建立EAMG模型后，进行灌胃治疗：空白组、模型组每天给予等体积的生理盐水，强的松组给予为5.4 mg/kg/d强的松悬液灌胃；葛根组给予2.08 g/kg/d葛根中药液灌胃；葛芪组给予3.65g/kg/d葛根、黄芪中药液灌胃；葛参组给予3.65 g/kg/d葛根、丹参灌胃；葛妙组给予8.33 g/kg/d葛根、四妙散灌胃；葛芪参妙组给予11.46 g/kg/d葛根、黄芪、丹参、四妙散中药液灌胃。大鼠灌胃给药体积为l0 mL/kg，灌胃治疗时间为4周。观察各组大鼠体重和精神状态的变化、大鼠肌力评分、大鼠游泳时间、大鼠AchR-Ab的表达、大鼠RNS生理肌电的变化、大鼠相关肌肉因子NGF和LN-2的表达变化情况。 结果:①造模成功后，与空白组比较，模型组大鼠体重明显减轻，差异有统计学意义（P<0.05）；第10 w治疗结束后，与模型组大鼠比较，各治疗组大鼠体重均升高，差异有统计学意义（P<0.05）；与强的松组比较，葛根组、葛芪组、葛参组、葛妙组大鼠体重均低于强的松组，差异有统计学意义（P<0.05）；葛芪参妙组的大鼠的体重增长值逐渐超过强的松组，但和强的松组区别不明显，差异无统计学意义（P>0.05）；②造模成功后，模型组大鼠的肌力评分明显高于空白组，差异有显著统计学意义（P<0.01）;治疗后各治疗组大鼠的肌力评分明显低于模型组，差异有统计学意义（P<0.05）；治疗后葛根组、葛芪组、葛参组及葛妙组肌力评分明显高于强的松组，差异有统计学意义（P<0.05）；治疗后葛芪参妙组大鼠肌力评分明显低于强的松组，差异有统计学意义（P<0.05）；③造模成功后，与空白组大鼠比较，模型组大鼠的游泳时间明显短于空白组大鼠，差异有统计学意义（P<0.05）；治疗后，各治疗组的游泳时间都明显长于模型组大鼠，差异有统计学意义（P<0.05）；与强的松组比较，葛根组、葛芪组、葛参组及葛妙组的游泳时间均短于强的松组，葛芪参妙组大鼠游泳时间长于强的松组，差异均有统计学意义（P<0.05）；④造模成功后，各造模组大鼠血清 AchR-Ab表达水平明显高于空白组大鼠，差异有统计学意义（P<0.05）；治疗后各治疗组大鼠 AchR-Ab水平明显低于模型组，差异均有统计学意义（P<0.05）；治疗后葛根组、葛芪组、葛参组大鼠 AchR-Ab表达水明显高于强的松组、葛妙组、葛芪参妙组大鼠AchR-Ab表达水明显低于强的松组，差异均有统计学意义（P<0.05）；⑤造模成功后，模型组大鼠的肌电波幅频率明显低于空白组大鼠，差异有统计学意义（P<0.05）；治疗后各治疗组大鼠的肌电波幅频率明显高于模型组大鼠，差异有统计学意义（P<0.05）；治疗后葛根组、葛芪组、葛参组、葛妙组大鼠肌电图波频率幅明显低于强的松组，差异有统计学意义（P<0.05）；葛芪参妙组的肌电图频率波幅明显高于强的松组，差异有统计学意义（P<0.05）；⑥造模成功后，与空白组比较，模型组大鼠骨骼肌中NGF阳性表达值明显降低，差异有统计学意义（P＜0.01）；治疗后与模型组大鼠比较，各治疗组大鼠的NGF阳性表达值都有升高，差异有显著统计学意义（P＜0.01）；与强的松组比较，葛根组、葛参组、葛芪组与、葛妙组中阳性表达率明显低于强的松组，差异有统计学意义（P＜0.05或 P＜0.01），葛芪参妙组大鼠的NGF阳性表达率和强的松组差异无统计学意义（P>0.05）。⑦造模成功后，与空白组比较，模型组大鼠骨骼肌中LN-2阳性表达值明显降低，差异有显著统计学意义（P＜0.01）；治疗后与模型组比较，各治疗组大鼠骨骼肌中LN-2阳性表达值都有明显的升高，差异有统计学意义（P＜0.01）；与强的松组比较，葛根组、葛参、葛妙组值明显较低，差异有统计学意义（P＜0.05）；葛芪组、与葛芪参妙组大鼠的LN-2阳性表达率和强的松组差异无统计学意义（P>0.05）。 结论： ①葛根及其复方对MG大鼠骨骼肌肌力及神经传导功能恢复均有一定效果，葛芪参妙组对MG大鼠的肌力恢复效果较好。 ②血清AchR-Ab含量、骨骼肌中NGF、LN-2表达水平和 MG发病表现出密切相关性。 ③葛根及其配伍在对 MG大鼠血清AchR-Ab含量、骨骼肌NGF、LN-2水平的表达具有一定的改善作用。