论文部分内容阅读
背景原发性肾小球疾病（primary glomerular disease,PGD）指病损局限于肾小球或主要是肾小球损害的一组肾脏疾病,病因大多不明,有多种病理类型。微小病变（minimal change disease,MCD）、局灶节段性肾小球硬化（focal segmental glomerulosclerosis,FSGS）、IgA肾病（IgA nephropathy,IgAN）和膜性肾病（membranous nephropathy,MN）是临床中常见的病理类型,病理结果的诊断主要依靠经皮肾穿刺活检,而肾穿刺活检术有血尿、肾周血肿甚至大出血等风险,氨基酸作为人体内重要的代谢产物,广泛参与肾脏的多种生理生化过程,血浆氨基酸谱在糖尿病肾病、慢性肾脏病、肾细胞癌等肾脏相关疾病中均得到了广泛的研究,有研究表明血浆氨基酸浓度的变化与肾小球的损伤密切相关,但针对不同病理类型的原发性肾小球疾病患者的血浆氨基酸谱尚未有研究。方法采用超高效液相色谱-串联质谱（ultra-performance liquid chromatography tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS）的方法,对104名原发性肾小球疾病患者和30名健康对照组（control group,CON）患者进行血浆氨基酸谱的靶向定量检测。其中,原发性肾小球疾病组患者的血浆在同一时间段内收集,并按肾穿刺病理结果分为4组,其中MCD组18例,FSGS组13例,IgAN组30例,MN组43例,采用正交偏最小二乘判别分析（Orthogonal Partial Least SquaresDiscrimination Analysis,OPLS-DA）模型,对MCD组与CON组、MCD组与Non-MCD组（不含有MCD组病例的PGD分组）、FSGS组与CON组、FSGS组与Non-FSGS组（不含有FSGS组病例的PGD分组）、IgAN组与CON组、IgAN组与Non-IgAN组（不含有IgAN组病例的PGD分组）、MN组与CON组、MN与Non-MN（不含有MN组病例的PGD分组）进行建模,并结合相应的载荷图和变量权重（variable importance projection,VIP）值,进行各个病理组氨基酸谱的差异性分析。通过受试者工作特征（Receiver Operating Characteristic,ROC）曲线评价差异代谢物生物标志物的诊断效能。通过对差异氨基酸进行单变量统计分析,进一步验证对组间差别贡献最大的氨基酸。运用线性回归分析方法评估差异代谢物与临床指标Alb、Cr、BUN、24h-UP、UA、e GFR的相关性,明确其与原发性肾小球疾病相关临床指标的关系。结果1.MCD组与CON组及MCD组与Non-MCD组的OPLS-DA模型及ROC曲线筛选出Asp,Ala为MCD组的主要差异代谢物,其中Asp在MCD组明显升高,Ala在MCD组明显降低;2.FSGS组与CON组及FSGS组与Non-FSGS组OPLS-DA模型及ROC曲线筛选出Gly为FSGS组的主要差异代谢物,且在FSGS组明显升高;3.IgAN组与CON组的OPLS-DA模型及ROC曲线筛选出Ser、Trp为IgAN组的差异代谢物,其中Ser在IgAN组升高,Trp在IgAN组降低,IgAN组与其他病理组间未筛选出差异代谢物;4.MN组与Non-MN组OPLS-DA模型及ROC曲线筛选出Trp、Lys、Arg为MN组的差异代谢物,其中Trp在MN组升高,Lys、Arg在MN组降低;5.在MN组差异代谢物筛选时发现Trp的VIP值1.604,AUC值仅为0.74,为进一步解释这一结果,将MN组按病理诊断分为PLA2R相关MN组和非PLA2R相关MN组,通过再次构建OPLS-DA模型及ROC曲线筛选出Trp为PLA2R相关MN组的主要差异代谢物,且在PLA2R相关MN组中明显升高;6.在对各病理组的差异代谢物进行筛选时发现Asn为PGD组与CON组的主要差异代谢物,且在PGD组中明显降低;7.相关性分析结果显示Asp与Alb呈负相关,Ala与Cr呈正相关,Gly与e GFR呈负相关,Asn与Alb呈正相关,Trp与Cr呈负相关,与UA、e GFR呈正相关,Arg与Cr呈正相关,Ser、Lys与Alb、Cr、BUN、24h-UP、UA、e GFR无明显相关性。结论1、Asp、Ala为MCD组的主要差异代谢物,其中Ala有望成为鉴别诊断MCD组的潜在生物标志物;2、Gly为FSGS组的主要差异代谢物,有望成为鉴别诊断FSGS组的潜在生物标志物;3、IgAN组与MN组的差异代谢物非本病理组所特有,但为IgAN组与MN组的氨基酸谱分析提供了一定的研究基础;4、Trp的改变可能为PLA2R相关MN的发病机制提供了新的研究方向;5、原发性肾小球疾病患者的血浆氨基酸谱与疾病的临床指标密切相关。