马鼻肺炎(Equine rhinopneumonitis,ER)是由马疱疹病毒 Ⅰ 型(Equine herpes virus type 1,EHV-1)和马疱疹病毒 Ⅳ 型(Equine herpesvirus type 4,EHV-4)引起的主要感染马属动物的高度接触性传染病。该病不仅可以表现不同程度的呼吸道症状,EHV-1还可以导致流产和致死的马脊髓性脑炎,给养马业带来严重的威胁。UL16蛋白为EHV-1的皮层蛋白之一,由ORF46编码,基因高度保守,在病毒复制和成熟过程中起重要作用。本实验的目的是制备EHV-1兔多克隆抗体,并通过原核表达系统获取体外表达的UL16蛋白。利用蔗糖梯度离心法将EHV-1 438/77株进行纯化,将纯化的病毒蛋白与弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂进行乳化,分别对家兔进行首次免疫和加强免疫制备免疫血清;通过Westerm Blot检测显示,制备的EHV-1兔免疫血清中的多抗与EHV-1全病毒蛋白结合反应性良好。根据在GenBank上发表的ORF46基因的序列设计特异性引物,在引物末端引入EcoRI和XhoI两个酶切位点,通过PCR来扩增目的片段。纯化的PCR产物克隆到表达载体pET-32a,构建重组原核表达质粒pET-32a-UL16,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态,鉴定阳性的重组菌分别以16℃和37℃、1mM的IPTG进行过夜诱导表达。SDS-PAGE结果显示,在59KD处出现与预期蛋白大小一致的条带。Western Blot鉴定结果显示,原核表达蛋白UL16可以与我们制备的EHV-1兔多克隆抗体有效的结合。本研究成功制备了抗原结合性良好的EHV-1兔多克隆抗体,并成功获得了具有良好反应原性的原核表达蛋白UL16。为EHV-1的UL16蛋白功能研究及新的诊断方法的建立提供研究基础。