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目的:探讨肿瘤坏死因子-alpha(TNF-α)联合氧化苦参碱(OM)对肺成纤维细胞增殖的信号转导机制的研究,从细胞信号转导的角度探讨尘肺发病机制,为治疗尘肺提供科学依据。方法:对SD大鼠乳鼠肺成纤维细胞进行原代培养和传代培养,传至4-5代后,用不同浓度的TNF-α联合不同浓度OM刺激成纤维细胞,培养一定的时间,用MTT比色法检测TNF-α对成纤维细胞增殖的影响;用Western blot技术检测成纤维细胞膜G_s蛋白的表达;用免疫细胞化学技术测定成纤维细胞内蛋白激酶C(PKC)和核转录因子—κB(NF-κB)的表达。结果:1.细胞增殖实验结果显示:当不同浓度的TNF-α作用于成纤维细胞时,在不同时间点,各实验组光密度(OD)值均较对照组显著增高(P＜0.05)。在4h时间点,10ng/mlTNF-α组OD值较5ng/ml和20ng/mlTNF-α组高,20ng/mlTNF-α组OD值较5ng/mlTNF-α组高,差异均有显著性(P＜0.05)。在24h时间点,随着TNF-α剂量的增加,各实验组OD值也明显升高,且各组间差异均有显著性(P＜0.05)。其中10ng/ml和20ng/mlTNF-α组OD值随着作用时间的延长而明显增高。2.Western blot结果显示:当不同浓度的TNF-α作用于成纤维细胞时,在不同时间点,各实验组间G_s蛋白的表达均无明显的统计学差异。3.PKC结果显示:当单独TNF-α作用成纤维细胞时,在不同时间点,各实验组PKC表达阳性单位数均较对照组高,其中10ng/mlTNF-α组PKC表达阳性单位数较5ng/ml和20ng/mlTNF-α组高,其差异均具有显著性(P＜0.05)。在24h时间点,20ng/mlTNF-α组PKC表达阳性单位数高于5ng/mlTNF-α组,较4h时间点相同剂量组显著增高(P＜0.05)。当TNF-α联合OM作用于成纤维细胞时,各实验组PKC表达阳性单位数值均明显高于对照组。随着OM剂量的增加,成纤维细胞PKC表达阳性单位数呈现逐渐降低趋势。10ng/ml TNF-α联合400μg/ml和800μg/mlOM组成纤维细胞PKC表达阳性单位数明显低于10ng/mlTNF-α组,其中10ng/mlTNF-α联合800μg/mlOM组成纤维细胞PKC表达阳性单位数较10ng/mlTNF-α联合200μg/mlOM组明显降低(P＜0.05)。4.NF-κB结果显示:当TNF-α单独作用于成纤维细胞时,在不同时间点,各实验组成纤维细胞NF-κB表达阳性单位数均较对照组明显增高,随着TNF-α剂量的增加,NF-κB表达阳性单位数均呈现增高趋势。在4h时间点,20ng/mlTNF-α组NF-κB表达阳性单位数明显高于5ng/ml和10ng/mlTNF-α组;在24h时间点,10ng/ml和20ng/mlTNF-α组NF-κB表达阳性单位数均较5ng/mlTNF-α组显著增高,各实验组成纤维细胞NF-κB表达阳性单位数均较4h时间点相同剂量组低,其差异均有显著性(P＜0.05)。当TNF-α联合OM作用于成纤维细胞时,各实验组NF-κB表达阳性单位数明显高于空白对照组。10ng/mlTNF-α联合400gg/mlOM组NF-κB表达阳性单位数显著低于10ng/mlTNF-α组,10ng/mlTNF-α联合200μg/ml和800μg/mlOM组(P＜0.05)。10ng/mlTNF-α联合800μg/mlOM组NF-κB表达阳性单位数明显高于其余各实验组(P＜0.05)。结论:1.TNF-α对成纤维细胞增殖有促进作用,这种促进作用在一定的作用时间呈现剂量依赖关系。2.膜G_s蛋白在TNF-α促成纤维细胞增殖过程中作用不明显。3.TNF-α可能通过活化PKC—NF-κB途径促进成纤维细胞的增殖。4.OM可能是通过干扰成纤维细胞内PKC—NF-κB通路中的信号物质而发挥其生物学效应的。