喹诺酮类药物广谱检测的研究

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喹诺酮类药物由于其化学结构上的特点,均具有极好的稳定性,可耐受高温、高湿度环境,可以长时间室温保存。因此,如果喹诺酮类药物在动物性食品中残留量较高,就会进入人体,进而产生胃肠道不良反应、中枢神经系统不良反应、对心脏的毒性作用、皮肤反应和光毒性及软骨毒性等一系列的毒副作用。近些年来,有关喹诺酮类药物在动物组织中的残留问题已引起广泛的注意。通过诺氟沙星和N-4-溴丁基邻苯二甲酰亚胺的烷基化反应,合成了诺氟沙星衍生物,这种合成方法在现有文献中均无报道,合成方法简单,产率较高,难点在于反应温度及反应时间的控制,还有反应产物的纯化问题。之后通过戊二醛法分别与BSA和OVA偶联,合成免疫原及包被原。经过紫外鉴定及后面的ELISA实验,确定半抗原与蛋白质偶联成功。分别免疫9只昆明小鼠,制备多克隆抗体,经过筛选,粗测交叉反应率,挑选出效价高、抑制好的抗血清,进行后续的ELISA实验。用经过筛选出的抗血清为基础,初步建立基于多克隆抗体的间接ELISA方法。通过优化包被溶液、抗体稀释液、封闭液、抗体反应时间、抗体与标准溶液的体积比等,最终得到较为理想的标准曲线,获得较好的实验结果。其中检测下限为0.0125ng/mL、半数抑制量(IC50)为0.30515ng/mL,标准曲线的相关系数为0.9923。阴性样本猪肾、鸡肉、鸡肝的检测限分别为0.9986ng/mL、0.4928ng/mL、0.6492ng/mL。本论文还从实验方法的灵敏度、特异性、准确性、精密度方面评估了ELISA方法。回收率在63%95%,变异系数小于20%。除与Orbifloxacin的交叉反应率低于5%外,与其余10种喹诺酮类药物分别在7.21%和91.23%之间。符合多残留ELISA方法检测的要求。也进一步证明关于诺氟沙星原药的改造过程是成功的,达到了预期的效果,满足喹诺酮类药物广谱检测的要求。
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