现阶段90%以上的人工授精采用17℃恒温保存的鲜精,但是17℃条件下猪精液保存时间较短,一般为3~7天,且易受微生物污染,不利于提高优秀种公猪精液利用率,增加了生猪品种改良成本。4℃低温不仅能有效降低精子生理代谢水平,而且能更长久的维持精液品质,防止微生物污染。然而,目前国内外对猪精液4℃低温保存研究还不深入,在精液低温保存技术方法、稀释保存液有效成分等方面仍需进一步研究与实践。本试验主要针对猪精液4℃低温保存中精液处理方法、稀释液有效成分等关键技术环节,开展细致研究,为猪精液4℃低温保存技术在养猪生产企业广泛应用提供理论和实践支持。(一)猪精液4℃保存技术方法的研究1.降温方法研究。利用自制的稀释剂配方,对人工采精后,精子密度为2亿/mL左右、呈乳白色、气味正常且精子活率达80%以上的猪原精,进行3倍稀释,对照组采用1层毛巾包裹,试验组分别利用4层毛巾和4层毛巾+泡沫箱包裹。本实验重复3次(下同)。结果表明:利用4层毛巾+泡沫箱包裹,保存第3d时,精子活率、活力分别为79.69%和63.81%,显著优于对照组(P<0.05)。2.降温平衡时间研究。在上述试验基础上,前期稀释操作相同,利用4层毛巾+泡沫箱包裹后,采用分步降温。首先,17℃恒温箱中,对照组平衡1.5h,试验组分别平衡2.5h和3.5h,平衡完毕,各组移入4℃冰箱中保存。结果表明:17℃恒温平衡2.5h,保存第3d时,精子活率、活力分别为76.35%、65.34%,显著优于对照组(P<0.05)。3.稀释倍数研究。利用自制的稀释剂配方,对人工采精后,精子密度为2亿/mL左右,且活率达80%以上的猪原精进行稀释,对照组稀释比例为1:1,试验组稀释比例分别为1:2、1:3、1:4,然后利用上述最佳的降温平衡方法保存。结果表明:采用原精与稀释液1:3稀释,保存第3d时,精子活率、活力分别为78.13%、69.65%,显著优于对照组(P<0.05)。(二)果糖和海藻酸钠对猪精液4℃低温保存效果影响的探究1.在前期预处理试验的基础上,利用BTS基础稀释剂中分别添加0、0.2、1、2、4mg/mL的果糖,探究不同浓度果糖对猪精液4℃保存效果的影响。结果表明:添加0.2mg/mL果糖,保存第3d时,精子活率、质膜完整率、顶体完整率和精子快速运动活力分别为79.17%、76.53%、80.58%和50.1%,显著优于对照组(P<0.05)。2.在BTS基础稀释液中分别添加0、0.2、1、2、4mg/mL的海藻酸钠,探究不同浓度海藻酸钠对猪精液4℃保存效果的影响。结果表明:添加1mg/mL海藻酸钠,保存第3d时精子活率、质膜完整率、顶体完整率和精子快速运动活力分别为85.55%、86.33%、87.51%和70.9%,显著优于对照组(P<0.05)。(三)果糖+海藻酸钠优化组合对猪精液4℃低温保存效果影响的探究第二步试验的基础上,利用BTS基础稀释液分别选取0.2、1mg/mL果糖和1、2mg/mL海藻酸钠进行稀释剂成分优化组合试验,利用成熟应用的稀释剂A品牌作对照,探究果糖+海藻酸钠对猪精液4℃保存效果的影响。结果表明:添加0.2mg/mL果糖+2mg/mL海藻酸钠,保存第7d时,精子活率、质膜完整率、顶体完整率分别为72.85%、71.19%、79.68%,显著优于对照组(P<0.05)。综上,果糖和海藻酸钠能显著提高猪精液4℃低温保存时间、精子活率等,其单独添加最适浓度分别为0.2mg/mL和1mg/mL;两种有效成分优化组合后,稀释液中添加果糖0.2mg/mL和海藻酸钠2mg/mL时,猪精液4℃低温保存效果最佳,保存第7d时仍具有较高的精子活率、质膜完整率、顶体完整率和精子快速运动活力。