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自第一例腹腔镜胆囊切除术在法国成功实施后,微创外科手术得到持续发展并不断普及。由于该技术与传统开放手术相比,具有术后疼痛轻、恢复时间短及良好的美容效果等优点,如今也用于活组织检查和各种恶性肿瘤的切除。然而,近年来,关于以CO2为气腹介质的腹腔镜技术是否会增加肿瘤腹腔播散和穿刺孔转移成为争论的焦点,至今仍无定论。许多研究证实CO2气腹能改变乳腺癌、结肠癌、卵巢癌等恶性肿瘤的生物学行为,但是,到目前为止,有关CO2气腹是否会影响肾癌的生物学行为尚未见报道。本研究通过建立体外模拟CO2气腹环境,研究了CO2气腹对人肾癌786-O细胞体外增殖的影响及相关机制,为评估CO2气腹腹腔镜应用于肾癌治疗的安全性提供实验室依据。第一部分模拟CO2气腹对人肾癌786-O细胞体外增殖的影响目的:通过建立体外模拟CO2气腹环境,观察CO2气腹对人肾癌786-O细胞体外增殖的影响。方法:建立体外模拟CO2气腹环境,以14mmHg气压对人肾癌786-O细胞作用不同时间(2h、4h),以培养于常规条件下肾癌细胞为对照,倒置显微镜下观察细胞形态变化;MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期变化。结果:与对照组比较,CO2气腹处理后的两组人肾癌786-O细胞增殖速度明显增快(P<0.05),细胞增殖指数显著增高(P<0.01),且增殖指数与气腹作用时间存在直线关系(R2=0.9840,P<0.01),细胞周期中处于G0-G1期的细胞比例显著降低(P<0.05),而处于S期和G2-M期的细胞比例显著增高(P<0.01);两气腹组比较,4h组增殖速度显著快于2h组(P<0.01),细胞周期中4h组中处于G0-G1期的细胞比例较2h组显著降低(P<0.05),而处于S期和G2-M期的细胞比例较2h组显著增高(P<0.05)。结论:体外模拟CO2气腹环境,可促进人肾癌786-O细胞增殖,且随着接触CO2时间的延长,肾癌786-O细胞增殖速度加快。第二部分模拟CO2气腹对人肾癌786-O细胞PCNA、Survivin和Caspase-3表达的影响目的:通过建立体外模拟CO2气腹环境,研究CO2气腹促进人肾癌786-O细胞体外增殖的相关机制。方法:建立模拟CO2气腹环境,以14mmHg气压对人肾癌786-O细胞分别作用2h和4h,设未处理组为对照,RT-PCR检测各组Survivin mRNA表达情况,免疫细胞SP法检测各组PCNA、Survivin和Caspase-3蛋白表达变化。结果:CO2气腹处理后的各组人肾癌786-O细胞PCNA蛋白、Survivin mRNA和Survivin蛋白表达均明显增加(P均<0.01),而Caspase-3蛋白表达显著减少(P<0.01)。结论:CO2气腹促进人肾癌786-O细胞增殖可能是通过增强细胞增殖相关基因PCNA的表达,同时增强凋亡抑制基因Survivin表达以抑制肿瘤细胞凋亡实现的。