牛血清白蛋白与人血清白蛋白键合液相手性固定相的制备及其性质的研究

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本文分别将牛血清白蛋白和人血清白蛋白键合到用1,1’-羰基咪唑活化的氨丙基硅胶表面,制备了两种白蛋白键合液相手性固定相。同时在这两种手性固定相上拆分了7种和5种旋光异构体。并对手性固定相的热力学和动力学参数进行了表征。本论文第二章阐述了以1,1’-羰基咪唑活化的氨丙基硅胶合成牛血清白蛋白键合手性固定相的方法,比较了柱上衍生与柱外衍生两种键合蛋白方法的优缺点,发现柱上衍生法要优于柱外衍生法。用牛血清白蛋白键合手性固定相成功拆分了色氨酸、华法令等7种旋光异构体,并考察了流动相的pH值以及溶液中正丙醇浓度对其拆分色氨酸的保留行为及分离度的影响。发现流动相为50 mM pH=7.0 的磷酸氢钠缓冲溶液,室温下拆分效果最好,(=2.21。第三章介绍了采用所合成的牛血清白蛋白键合手性柱拆分实际样品--亚叶酸钙的方法,考察了不同色谱条件对其拆分的影响,并对其色谱条件进行了优化。优化结果为以pH 6.0的50 mmol/L磷酸氢钠缓冲溶液为流动相,流速1 ml/min时,[6S]-、[6R]-LV分别在6.45 min和12.00 min时出峰,全过程可在16 min内实现基线分离,其分离度α = 2.19,Rs = 3.88。并做了热力学上的探讨,推测出亚叶酸钙与BSA之间可能属于单个位点作用。另外,将所合成的牛血清白蛋白键合手性柱作为分子生物色谱,快速筛选中药川芎、当归中的有效成分。第四章陈述了以1,1’-羰基咪唑活化的氨丙基硅胶合成人血清白蛋白键合手性固定相的方法,键合量达到57.5 mg/g。用人血清白蛋白键合手性固定相成功拆分了色氨酸、华法令等5种旋光异构体,并考察了流动相的pH值,溶液中正丙醇浓度,盐浓度对拆分色氨酸的影响。发现流动相为50 mM pH=7.0 的<WP=3>磷酸氢钠缓冲溶液,25℃时拆分效果最好,(=10.87。第五章考察了温度对色氨酸保留值的影响,ΔΔH= -2.64 kJ/mol,ΔΔS= 8.382 J/mol·K;利用前沿分析法,分别测得了色氨酸在HSA手性柱上的吸附常数为3.23×104 L/mol,活性位点数是250 nmol/g,当L-色氨酸浓度由203 μmol/L 上升至 324 μmol/L时,饱和吸附量从244 ng 上升至 2092 ng .
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